Pesquisa
Adição da ciclodextrina carregada com colesterol durante a criopreservação de sêmen canino
Mestrado em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos
Autor: Fernando Henrinque Sucupira Sarto
Orientador: Leonardo Franco Martins
Defendido em: 19/04/2017
Resumo
O processo de criopreservação do sêmen canino provoca redução na fertilidade comparada ao sêmen fresco e resfriado, devido à formação de cristais de gelos oriundos das variações de temperatura lesionando as células espermáticas. Durante o processo de criopreservação do sêmen, as membranas espermáticas passam por modificações que ocorrem pela desestabilização da bicamada lipídica, devido às várias mudanças de fase e reorganização estrutural da membrana plasmática dos espermatozoides, com grande efluxo de colesterol a partir da membrana celular espermática, causando uma capacitação espermática prematura. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da adição de ciclodextrina carregada com colesterol (CCC) durante criopreservação de sêmen canino sobre os aspectos físicos, morfológicos e integridade da membrana plasmática. Foram utilizados 10 ejaculados de um cão da raça Buldogue Inglês com sete anos de idade pesando 32 Kg. Cada ejaculado foi dividido em 3 alíquotas de 360 milhões de espermatozoides: grupo controle, grupo 2 mg de CCC e grupo 5 mg de CCC para 120 milhões de espermatozoides, as amostras permanecerem em banho-maria por 15 minutos, a 37°C. Após a incubação, foi feita a diluição do ejaculado com diluente de refrigeração 1:3, centrifugação à 700 g por 10 minutos, ressuspensão do pellet de espermatozoides com diluente crioprotetor, envase de palhetas de 0,25 ml com 60 milhões de espermatozoides em cada e em seguida foram refrigeradas a 5°C por 2 horas e criopreservadas em nitrogênio líquido. As palhetas foram descongeladas em banho-maria a 37°C durante um minuto, para análise posterior dos aspectos físicos e morfológicos e teste hiposmótico, e coloração supravital. Foram observadas diferenças entre os grupos na motilidade retilínea progressiva do sêmen congelado/descongelado, sendo o grupo de 5 mg de CCC inferior aos demais (p<0,05), e nos percentuais de espermatozoides íntegros no teste supravital, o grupo de 2 mg de CCC superior aos outros (p<0,05). Conclui-se que a adição da CCC influencia a qualidade do sêmen canino congelado/descongelado, em que o grupo de 2 mg de CCC por 120 milhões de espermatozoides melhora a qualidade seminal e o grupo de 5mg de CCC por 120 milhões de espermatozoides influenciou negativamente a qualidade seminal.
Palavras-chave
Cão. Congelamento. Espermatozoide. Membrana espermática.
Title
Addition of cholesterol-loaded cyclodextrin during cryopreservation of canine semen.
Abstract
Dog semen cryopreservation causes a reduction in fertility compared to fresh and cooled semen, due to the formation of ice crystals arising from temperature variations, damaging the sperm cells. During the semen cryopreservation process, sperm membranes undergo changes due to the destabilization of the lipid bilayer due to the various phase changes and structural reorganization of the sperm plasma membrane, with a large efflux of cholesterol from the sperm cell membrane, causing premature sperm capacitation. The objective of this work is to evaluate the effect of the addition of Cholesterol-Loaded Cyclodextrin (CLC) during cryopreservation of canine semen on the physical and morphological aspects and plasma membrane integrity. One English Bulldog male with 32 kg and 7 years old was used. Ten ejaculates were used for cryopreservation. Ejaculate was divided into 3 aliquots of 360 million spermatic cells: a control group that received no addition of CLC, 2mg of CLC and 5mg of CLC for 120 million spermatozoa, after the three groups incubated for 15 minutes at 37 ° C. After incubation, the ejaculate was diluted with a 1: 3 diluent, centrifuged at 700g for 10 minutes, resuspended from the spermatozoa pellet with cryoprotective diluent, armazened on 0,25 ml straws with 60 million spermatozoa and after refrigeration at 5 ° C for 2 hours were cryopreserved in liquid nitrogen. Straws were thawed at 37 ° C for one minute. After semen aspects, hyposmotic test, and Supravital staining were measurement. Differences were observed between treatments in progressive rectilinear motility of frozen / thawed semen, with a treatment of 5 mg lower than the others (p <0,05), and in percentages of intact spermatozoa in the Supravital test, with a treatment of 2 mg higher to the others (p <0.05). It was concluded that CCC treatment influences the quality of frozen / thawed canine semen, where the treatment of 2mg CCC per 120 million sperm improved seminal quality and 5mg CCC per 120 million spermatozoa negatively influenced seminal quality of frozen / thawed canine spermatozoa.
Keywords
Dog, Freezing, Spermatozoa, Plasm membrane.