Pesquisa
Alterações na parede intestinal e no plexo mientérico do jejuno de ratos infetados por oocistos de Toxoplasma gondii
Mestrado em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos
Autor: Larissa Marchi Zaniolo
Orientador: Débora de Mello Gonçales Sant’Ana
Defendido em: 26/04/2011
Resumo
Neste trabalho objetivou-se avaliar as alterações causadas por uma infecção crônica por Toxoplasma gondii no plexo mientérico e na túnica muscular do jejuno de ratos. Para isto, foram utilizados vinte ratos (Rattus norvegicus) Wistar machos, adultos, com sessenta dias de idade, pesando 258,58±13,64g. Foram separados aleatoriamente em dois grupos experimentais: GC (n=10) grupo controle e GI (n=10) grupo infectado. Os animais do GC receberam solução de cloreto de sódio a 0,9% e os do GI foram inoculados com 500 oocistos esporulados, de uma cepa genótipo II (ME49) de T. gondii, por via oral. Após trinta e seis dias de infecção, os animais foram anestesiados e submetidos à eutanásia. Através da laparatomia o jejuno de cada rato foi retirado, mensurado em seu comprimento e largura para cálculo da área. Colheu-se sangue dos animais por punção do plexo venoso retro-orbital, visando detecção de anticorpos séricos (IgG) anti-T. gondii pelo método de aglutinação direta. Os segmentos foram lavados e fixados para realização das técnicas histológica, histoquímica e imunofluorescência. Para análise histológica um anel de três centímetros a partir da flexura duodeno-jejunal de cinco animais de cada grupo foi coletado e submetido à rotina histológica. Foram obtidos cortes transversais semi-seriados de 4 μm, corados com Hematoxilina e Eosina (HE). Foram realizadas 80 medidas na túnica muscular, distribuídas uniformemente em toda a circunferência intestinal. Os preparados totais do jejuno foram corados pela técnica de Giemsa e submetidos à técnica histoenzimológica da NADH-d. Foram contados os neurônios presentes em 120 campos microscópicos ao longo da circunferência intestinal. Foi mensurada a área do corpo celular e núcleo e calculada a área do citoplasma de 300 neurônios do plexo mientérico de cada rato. Também foi realizada a técnica de imunofluorescência que evidencia as varicosidades dos neurônios imunorreativos ao peptídeo intestinal vasoativo (VIP-IR) do plexo mientérico. Foi mensurada a área de 400 varicosidades de cada animal. Os animais do GI apresentaram anticorpos anti-T. gondii, enquanto os animais do GC tiveram resultados negativos. Os animais infectados apresentaram fezes amolecidas, porém não foram observadas alterações no comprimento, largura e área do jejuno. A medida da túnica muscular demonstrou um aumento de 32,2% (p<0,05) no GI enquanto a espessura total da parede uma redução de 9,2% (p<0,05). A análise quantitativa dos neurônios mientéricos evidenciados pela técnica de Giemsa demonstrou uma perda de 32,8% (p<0,05) enquanto na técnica NADH-d não houve diferença quantitativa significativa. Tanto os neurônios da população total quanto os da subpopulação NADH-dp sofreram hipertrofia do corpo celular e núcleo. A área do citoplasma na população total apresentou um aumento de 7,6% enquanto na subpopulação NADH-dp verificou-se uma diminuição de 5,3%. Na análise das varicosidades VIP-IR houve um aumento das varicosidades que apresentavam menor área assim como da intensidade de brilho. Conclui-se que a infecção induzida por oocistos de T. gondii (ME49) causou morte e hipertrofia dos neurônios do plexo mientérico, alteração nas fibras nervosas VIP-IR e na parede intestinal no jejuno de ratos.
Palavras-chave
intestino delgado, peptídeo intestinal vasoativo, plasticidade neuronal, sistema nervoso entérico.
Title
CHANGES IN THE INTESTINAL WALL AND IN THE MYENTERIC PLEXUS OF JEJUNUM IN RATS IFECTED BY OOCYSTS OF *Toxoplasma gondii*.
Abstract
This work aimed to evaluate the changes caused by chronic infection with Toxoplasma gondii in the myenteric plexus and muscular layer of the jejunum of rats. For this, we used twenty rats (Rattus norvegicus) Wistar male adult, sixty days old, weighing 258.58 ± 13.64 g. They were randomly divided into two groups: CG (n = 10) control group and IG (n = 10) infected group. The CG animals received solution of sodium chloride 0.9%, and the IG were inoculated with 500 oocysts of a genotype II strain (ME49) of T. Gondii, orally. After thirty-six days of infection, the animals were anesthetized and euthanized. The jejunum of each rat was removed through laparotomy, measured in its length and width to calculate the area. Blood samples were collected from animals by puncturing the retro-orbital venous plexus, in order to detect serum antibodies (IgG) anti-T. gondii by direct agglutination method. The segments were washed and set to perform the techniques of histology, histochemistry and immunofluorescence. For histological analysis a ring of three centimeters from the duodenal-jejunal flexure of five animals from each group were collected and submitted for histological examination. Semi-serial sections of 4 µm were obtained, stained with Hematoxylin and Eosin (HE). 80 measurements were performed in the muscular layer,cuts evenly distributed throughout the intestinal circumference. Total preparations of the jejunum were stained with the Giemsa technique and subject to the histoenzymology technique of NADH-d. Neurons were counted in 120 microscopic fields present along the intestinal circumference. The cell body and nucleus area was measured and the area of the cytoplasm of 300 neurons of the myenteric plexus of each mouse was calculated. It was also performed the immunofluorescence technique that shows the varicosities of neurons immunoreactive to vasoactive intestinal peptide (VIP-IR) of the myenteric plexus. It was measured the area of 400 varicosities of each animal. The animals of the IG presented antibodies anti-T. Gondii , while animals in the CG were all negative. Infected animals showed loose stools, but no changes were observed in the length, width and area of the jejunum. The muscular layer showed an increase of 32.2% (p <0.05) in IG while the total wall thickness a reduction of 9.2% (p <0.05). Quantitative analysis of myenteric neurons revealed by the Giemsa technique showed a loss of 32.8% (p <0.05) while in the NADH-d technique there was no significant quantitative difference. Both the neurons of the total population and the subpopulation of NADH-dp underwent hypertrophy of the cell body and nucleus. The cytoplasm area in the total population showed a 7.6% increase while in the subpopulation NADH-dp there was a decrease of 5.3%. In the analysis of VIP-IR varicosities there was an increase in varicosities that had a smaller area as well as the intensity of brightness. It was concluded that the infection induced by oocysts of T. gondii (ME49) caused the death and hypertrophy of the myenteric plexus neurons, alteration in the VIP-IR nerve fibers and in the intestinal wall into the jejunum of rats.
Keywords
small intestine, vasoactive intestinal peptide, neuronal plasticity, enteric nervous system.