Pesquisa
Análise morfométrica da parede jejunal de ratos desnutridos proteicamente suplementados com probióticos
Mestrado em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos
Autor: Catchia Hermes Uliana
Orientador: Débora de Mello Gonçales Sant’Ana
Defendido em: 15/04/2010
Resumo
Objetivou-se investigar as alterações causadas pela infecção por Toxoplasma gondii em neurônios mientéricos do jejuno de ratos. Para tanto, utilizaram-se quinze ratos (Rattus novergicus) machos, adultos, da linhagem Wistar, com 90 dias de idade, provenientes do biotério da Universidade Paranaense - UNIPAR. Foram separados aleatoriamente em três grupos experimentais: controle (GC, n=5), infectado por 30 dias (G30, n=5) e infetado por 90 dias (G90, n=5). Os animais do GC receberam solução salina por via oral. Os ratos do G30 aos 150 dias de vida e os animais do G90 aos 90 dias de idade foram inoculados com 500 oocistos esporulados, de uma cepa genótipo III (M7741) de T. gondii, pela via oral. Aos 180 dias de idade, todos os animais foram anestesiados, submetidos à eutanásia e, por meio de laparotomia, o jejuno foi retirado, mensurado em seu comprimento e largura para cálculo da área. Colheu-se sangue dos animais anestesiados pela punção do plexo venoso retro-orbital, previamente a eutanásia, visando detecção de anticorpos séricos (IgG) anti-T. gondii pelo método de aglutinação direta. Depois de retirados, os segmentos intestinais foram lavados, e submetidos à técnica de Giemsa para avaliação da população neuronal total, e à técnica de NADPH-d para a subpopulação nitrérgica. Os segmentos foram dissecados, com a retirada da túnica mucosa e tela submucosa, restando preparados totais formados pela túnica muscular e serosa. Foi contado o número total de neurônios mientéricos de cada animal em 120 campos microscópicos com objetiva de 40x, distribuídos uniformemente por toda a circunferência intestinal. O número estimado de neurônios colinérgicos (NADPH-d negativos) foi determinado, reduzindo-se a média dos neurônios evidenciados pela marcação da NADPH-d, da população total de neurônios. Foi mensurada a área do corpo celular, do núcleo e calculado a área do citoplasma de 300 neurônios do plexo mientérico de cada animal para cada técnica. Todos os animais inoculados apresentaram anticorpos anti- T. gondii, enquanto os animais do GC tiveram resultado negativo. Os animais inoculados apresentaram maior ganho de peso corporal quando comparados ao GC. Todavia, não foram observadas alterações no comprimento, largura e área do jejuno. A análise quantitativa dos neurônios mientéricos evidenciados pela técnica de Giemsa e pela NADPH-d+ (neurônios nitrérgicos), bem como, o número estimado de neurônios NADPH-d- (neurônios colinérgicos) não apresentaram diferença significativa. Os neurônios mientéricos da população total apresentaram atrofia nos animais do G30 e uma hipertrofia aos 90 dias (G90). A análise morfométrica dos neurônios NADPH-d+ demonstrou atrofia tanto no G30 como no G90 quando comparados ao GC, contudo os neurônios do G90 demonstraram hipertrofia em relação ao G30. Verificou-se que após 30 dias de inoculação houve tendência de aumento da incidência de neurônios menores e redução de e neurônios maiores, tendência que se inverteu após 90 dias de inoculação. Conclui-se que a infecção por uma cepa genótipo III de T. gondii utilizado neste estudo não causou morte neuronal, no entanto observou-se atrofia em neurônios da população e da subpopulação nitrérgica durante 30 dias de infecção, e que esses neurônios tenderam a sofrer hipertrofia após 90 dias no jejuno de ratos.
Palavras-chave
intestino delgado, morfometria, plasticidade neuronal, sistema nervoso entérico, toxoplasmose
Title
CHRONIC INFECTION WITH Toxoplasma gondii CAUSES MYENTERIC NEUROPLASTICITY OF THE JEJUNUM OF RATS
Abstract
The aim of this study was to investigate the changes caused by the infection with Toxoplasma gondii in the jejunum of rats. The experiment was conducted using 15, 90-day-old, Wistar rats (Rattus novergicus) from the UNIPAR – Universidade Paranaense vivarium. They were randomly divided into three groups: control (CG, n=5), infected for 30 days (G30, n=5), and infected for 90 days (G90, n=5). The CG animals received oral saline solution. Rats from the G30, at 150 days of age, and G90, at 90 days of age, were orally inoculated with 500 sporulated oocysts from a genotype III strain of T. Gondii (M7741). At 180 days of age, all animals were anesthetised, euthanized, and had their jejunum removed through laparotomy to measure its length and height for the calculation of its area. Blood from the anaesthetised animals was collected by orbital plexus puncture previously to the euthanasia. The serum was examined for the presence of (IgG) anti-T. gondii by testing direct agglutination. After removal, the intestinal segments were washed and underwent Giemsa banding analysis for the evaluation of the total population, and NADPH-d histochemistry was applied for the nitrergic subpopulation. They were then dissected, had the tunica mucosa and tela submucosa removed, resulting in the whole mounts formed by the muscle tunic and the serosa. The total number of myenteric neurons from each animal within 120 microscopic fields uniformly distributed on the intestinal circumference was counted. The estimated number of cholinergic neurons (NADPH-d negative) was determined by decreasing the average of neurons evidenced by the NADPH-d staining of the total population of neurons. The area of the body cell and nucleus was measured and the area of the cytoplasm of 300 neurons in the myenteric plexus of each animal per technique was calculated. All animals presented anti-T. gondii antibodies, whereas the CG animals presented negative results. Infected animals had higher body mass gain when compared to the CG. No alterations with respect to length, width and area of the jejunum were observed. The quantitative analyses of the myenteric neurons evidenced with Giemsa staining and NADPH-d+ histochemistry, as well as the estimated number of NADPH-d- (cholinergic neurons) presented no significant difference. The myenteric neurons of the total population presented atrophy in the G30 animals and a recovery resulting in hypertrophy at 90 days (G90). Morphometric analysis of the NADPH-d+ neurons showed atrophy for both the G30 and G90 when compared to the CG; however, neurons from the G90 showed hypertrophy in relation to the G30. It was observed that at 30 days, the infection tended to increase the incidence of smaller neurons and decrease of larger neurons – this tendency was inverted at 90 days of infection. We concluded that the infection with a genotype III of T. gondii used in this study caused no neuronal death, however, we observed atrophy in neurons from the nitrergic population and subpopulation at 30 days of infection, and that those neurons tend to hypertrophy at 90 days in the jejunum of rats.
Keywords
enteric nervous system, morphometry, neural plasticity, small intestine, toxoplasmosis.