Pesquisa
Atividade antineoplásica in vivo de micélio de Agaricus sp em diferentes meios de cultivo
Mestrado em Biotecnologia Aplicada à Agricultura
Autor: Míria Benetati Delgado Bertéli
Orientador: Nelson Barros Colauto
Defendido em: 12/04/2010
Resumo
Os fungos do gênero Agaricus são basidiomicetos que possuem propriedades imunomoduladoras e antitumorais, sendo que a atividade biológica pode ser afetada pela linhagem e pela composição do meio de cultivo. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antineoplásica do micélio de linhagens do gênero Agaricus crescido em meio líquido com diferentes concentrações de nitrogênio no modelo tumoral de Sarcoma 180 in vivo. Para a produção de biomassa foi utilizado meio mínimo Pontecorvo acrescida de fontes de nitrogênio aprotéica e protéica (NaNO3 e proteína isolada de soja) para determinação das faixas de crescimento e posterior preparo dos extratos fúngicos. Para o teste da atividade antineoplásica foram utilizados camundongos Swiss fêmeas, não isogênicas que receberam no dorso 05 mL de células tumorais (2 x 106 células mL-1) e após sete dias de adaptação foram separadas em grupos (n=12) e tratados durante 23 dias com: extrato aquoso preparado a quente ou mistura aquosa do micélio integral preparado a temperatura ambiente das linhagens de Agaricus blazei, Agaricus brasiliensis e Agaricus subrufescens, crescidas em meio líquido com 0,5 ou 5% de proteína isolada de soja. Os controles foram: solução salina 0,9%, extrato de chá-verde (Camellia sinensis) ou Ifosfamida®. Foi determinada a porcentagem de inibição do tumor em relação ao controle com solução salina, bem como o índice esplênico. Ao final foi avaliado o eritrograma e o leucograma dos animais. Concluiu-se que o uso de NaNO3 como fonte aprotéica de nitrogênio não foi eficiente e o de proteína isolada de soja foi eficiente para a produção de biomassa dos fungos. As linhagens apresentaram uma curva bastante definida com pico de produção em torno de 20 mg mL-1 para A. blazei e A. subrufescens, entre 15 e 20 mg mL-1 para A. brasiliensis e . A atividade antioneoplásica não mostrou diferenças entre as linhagens de Agaricus que receberam extrato a quente e foram iguais à atividade obtida por Ifosfamida® e extrato de chá verde (Camellia sinensis) todas com mais de 80% de inibição tumoral. O uso do extrato a quente do micélio, e não a mistura aquosa do micélio promove a maior redução tumoral e evita o desenvolvimento de anemia e leucopenia. O aumento da concentração de proteína isolada de soja de 0,5 para 5% aumenta a atividade antioneplásica apenas para a linhagem Agaricus subrufescens. Este trabalho demonstra que a suplementação com extratos preparados a quente como chás, ao invés de administrações de cápsulas, preparadas pela moagem integral do fungo, são mais eficientes na inibição tumoral.
Palavras-chave
agricultura, cogumelo, micélio, antineoplásico, extrato fúngico.
Title
ANTINEOPLASTIC ACTIVITY IN VIVO OF MYCELIUM OF Agaricus sp AT DIFFERENT CONCENTRATIONS OF NITROGEN
Abstract
The fungi of the genus Agaricus are basidiomycetes that have immunomodulatory and antitumor properties, and biological activity can be affected by strain and by the composition of culture medium. The aim of this study was to evaluate the antineoplastic activity of the mycelium of strains of the genus Agaricus grown in liquid medium with different concentrations of nitrogen in the Sarcoma 180 tumor model in vivo. For the production of biomass was used minimal medium plus Pontecorvo sources of protein and no protein nitrogen (NaNO3 and isolated soy protein) for determining the ranges of growth and subsequent preparation of fungal extracts. To test the anticancer activity was used Swiss female mice, isogenic not receiving the back 5 mL of tumor cells (2 x 106 cells mL-1) and after seven days of adaptation were separated into groups (n = 12) treated for 23 days with: water extract prepared in hot water or a mixture of mycelium fully prepared at room temperature strains of Agaricus blazei, Agaricus brasiliensis and Agaricus subrufescens, grown in liquid medium with 0.5 or 5% soy protein isolate. Controls were: saline 0.9% green tea extract (Camellia sinensis) or Ifosfamide®. We determined the percentage of tumor inhibition compared to control saline, and the splenic index. At the end we evaluated the erythrocyte and leukocyte profile. It was concluded that using NaNO3 as nitrogen source no protein was inefficient and isolated soy protein was effective for the production of fungal biomass. The strains showed a well defined curve with peak production of around 20 mg mL-1 for A. blazei and A. subrufescens between 15 and 20 mg mL-1 for A. brasiliensis. Antioneoplásica activity showed no differences between strains of Agaricus extract that received hot and were equal to the activity obtained by Ifosfamide® and green tea extract (Camellia sinensis), all with more than 80% tumor inhibition. The use of the hot extract of the mycelium and not the aqueous mixture of mycelium promotes greater tumor reduction and prevents the development of anemia and leukopenia. Increasing the concentration of soy protein isolate by 0.5 to 5% increases the activity antioneplásica only for Agaricus subrufescens lineage. This study demonstrates that supplementation with extracts prepared as hot tea, rather than administration of capsules, prepared by grinding whole fungus, are more efficient in inhibiting tumor.
Keywords
agriculture, mushroom, mycelium, antineoplasic, fungal extract.