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Atividade biológica de Agaricus brasiliensis em diferentes fases de maturação do basidiocarpo

Mestrado em Biotecnologia Aplicada à Agricultura
Autor: Francielly Mourão
Orientador: Nelson Barros Colauto
Defendido em: 25/08/2008
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Resumo

Agaricus brasiliensis Wasser et al. (Agaricus blazei ss. Heinemann), popularmente conhecido no Brasil como Cogumelo Medicinal, Cogumelo-do-sol, é um fungo de cultivo expressivo no país devido às suas propriedades medicinais, evidenciadas em diversos trabalhos científicos, que vem ganhando importância em outros países, principalmente para uso nutracêutico. Os nutracêuticos obtidos de cogumelos minimamente processados e encapsulados podem ser consumidos como suplementos dietéticos. São utilizados principalmente devido ao potencial terapêutico como imunomodulatório e anti-tumoral. As frutificações de A. brasiliensis são colhidas no Brasil principalmente no estágio imaturo, quando o píleo ainda está fechado, atendendo aos padrões morfológicos pré-estabelecidos e é nesse estágio que se obtém maior valor comercial para exportação. A atividade biológica desse cogumelo é dependente da composição química das frutificações que pode variar com a maturação, particularmente em relação ao conteúdo de β-D-glucanas que constituem a parede celular do fungo. No presente estudo, foram utilizadas frutificações de diferentes linhagens de A. brasiliensis colhidas em diferentes estágios de maturação – imaturas (basidiocarpo fechado), maduras (basidiocarpo aberto), a fim de avaliar a atividade antioxidante, atividade sobre a migração celular em processo inflamatório e atividade antineoplásica. Para a avaliação da atividade antioxidante foram utilizadas dez linhagens de A. brasiliensis em duas fases de maturação do basidiocarpo (aberto e fechado). Foram estudadas condições de extração de solventes (DMSO (dimetilsufóxido), etanol, metanol ou água), temperatura (15, 30, 45 ou 60 °C) e tempo (15, 30, 45 ou 60 min). A atividade seqüestradora de radicais foi calculada pela percentagem da descoloração do 1,1-difenil-2-picrilhidrazil (DPPH). Para cada 0,1 ml de extrato bruto foi adicionado 2,9 ml de solução metanólica de DPPH (60 μM), preparado no momento do uso. A leitura foi realizada após 30 min. A absorvância foi medida a 515 nm usando espectrofotômetro. As diferenças entre as médias foram avaliadas pelo teste de Tukey (p≤0,05). Para a avaliação da atividade de A. brasiliensis sobre a migração celular em processo inflamatório foi utilizado ratos Wistar macho, de maneira que a indução da resposta inflamatória foi induzida através da formação de bolsa de ar no dorso dos animais adicionados de solução aquosa de carragenina (2%), foram realizados coletas do sangue exsudato em diferentes etapas do experimento (antes do tratamento, 8 dias após o tratamento, 18 dias de tratamento 6 h após a indução da resposta inflamatória), sendo determinados a contagem total em câmara de Newbauer e diferencial das células através de extensões sanguíneas coradas pelo método clássico de coloração de May Grunwald-Giemsa. Para a avaliação da atividade antineplásica de A. brasiliensis foram utilizados camundongos fêmeas as quais foram inoculados com células de Sarcoma 180 no tecido subcutâneo dos animais, após sete dias da inoculação os animais foram tratados com extratos de A. brasiliensis. Após 30 dias do início dos experimentos os animais sofreram eutanásia através de administração de excesso de anestésico, onde foram retirados o baço e a massa tumoral a fim de serem medidos e calculados. O tumor foi medido por régua milimetrada e seu volume calculado. A inibição foi calculada considerando o volume do tumor do grupo Controle como 100%. Os resultados obtidos neste trabalho demonstram que o cogumelo A. brasiliensis em diferentes linhagens e estágios de maturação são uma fonte natural de antioxidantes, sendo a linhagem ABL99/29A, basidiocarpo fechado, aquela que apresentou maior atividade antioxidante. Os basidiocarpos fechados apresentaram atividade antioxidante, em média, 24% ± 2% maior quando comparados aos basidiocarpos abertos. Nossos resultados demonstraram que o extrato aquoso obtido de A. brasiliensis ABL99/25 apresentou atividade inibitória sobre a infiltração de leucócitos para o foco da lesão. Esta inibição foi mais acentuada quando foram utilizados basidiocarpos fechados. Foi constatado efeito antineoplásico do extrato aquoso de A. brasiliensis, porém não foi observada diferença significativa em função do estágio de crescimento do basidiocarpo para a linhagem ABL97/11 de Agaricus brasiliensis, sendo a atividade antineoplásica média dos basidiocarpos de 89,22%.

Palavras-chave

Antioxidante, antineoplásica, basidiocarpo, glucanas.

Title

BIOLOGICAL ACTIVITY OF Agaricus brasiliensis ON DIFFERENT BASIDIOCARP MATURATION STAGES

Abstract

Agaricus brasiliensis Wasser et al. (Agaricus blazei ss. Heinemann), popularly known in Brazil as Medicinal Mushroom, Sun Mushroom, is a fungus cultivated because of its medicinal properties, highlighted in several scientific papers, and are gaining importance in several countries, mainly because of its functional use. The mushrooms are minimally processed and encapsulated to be consumed as dietary supplements. They are used mainly due to the potential therapeutic as immunomodulatory and antitumor activity. The fructifications of A. brasiliensis are collected in Brazil mainly in the immature stage, when the pileus is still closed, to attend commercial standard patterns. The biological activity of the mushroom is dependent on the chemical composition of fructifications, particularly in relation to the content of β-D-glucan which are the cell wall of the fungus. In this study, it was used basidiocarps of different collected stages of maturity – immature basidiocarp (closed pileus), mature basidiocarp (opened pileus) from different strains of A. brasiliensis to evaluate the antioxidant activity (ABL99/26, ABL99/28, ABL99/29 and ABL99/26 and ABL99/29A closed basidiocarp, ABL99/28, ABL99/29, ABL99/30 and 99/29A opened basidiocarp), cell migration in acute inflammatory process activity (ABL99/25, opened and closed basidiocarp), induced by agent phlogistic, and antineoplastic activity (ABL97/11, opened and closed basidiocarp). The data obtained in this work shows that the mushroom of A. brasiliensis strains, on different stages of maturation, can be included as a natural source of antioxidant food, being the strain ABL99/29A, closed basidiocarp, the strain with the highest antioxidant activity. Closed basidiocarps have an average of 24% ± 2% higher antioxidant activity when compared to opened basidiocarps. It was observed antitumor effect of aqueous extract of A. brasiliensis, but no significant difference was observed according to the maturation stage of the basidiocarp for the strain ABL97/11 of Agaricus brasiliensis, and the basidiocarp average antineoplastic activities were of 89.22%. Our results showed that the aqueous extract obtained from A. brasiliensis (ABL99/25) presented important inhibitory activity on the infiltration of leukocytes to the outbreak of the injury, and the mushroom with closed basidiocarp showed more activity that the opened basidiocarp.

Keywords

Antioxidant, antineoplastic, basidiocarpo, glucans.

Pesquisa