Pesquisa
Avaliação morfoquantitativa de neurônios mientéricos do cólon proximal de ratos tratados com o herbicida ácido 2,4 diclorofenoxiacético
Mestrado em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos
Autor: Wagner Nanni
Orientador: Sandra Regina Stabille
Defendido em: 26/03/2010
Resumo
Os sintomas decorrentes da neurotoxicidade do ácido 2,4- diclorofenoxiacético (2,4-D) incluem rigidez, letargia e anorexia, irritação gastrintestinal, náuseas, vômitos e diarréia e não se conhece seus efeitos no plexo mientérico. Considerando a utilização deste herbicida na agricultura, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da ingestão de 2,4-D sobre alguns aspectos quantitativos e morfométricos de neurônios mientéricos do cólon proximal de ratos. Foram utilizados ratos machos (Rattus norvegicus) Wistar de 60 dias de idade. Por 15 dias, foi fornecida, via gavagem, dose de 2,4-D (5 mg/kg/dia) diluída em 1 mL de água aos ratos (n = 5) do grupo experimental (grupo E). Um grupo controle de ratos (n = 5) permaneceu igual período sem receber 2,4-D. Os animais foram pesados diariamente para ajuste da dose de 2,4-D e receberam ração comercial Nuvital e água sem restrição. Após eutanásia com dose letal de tiopental (40 mg/Kg), o cólon proximal foi retirado e, após ter a área mensurada, foi submetido aos procedimentos para obtenção de preparados de membrana corados pela técnica de Giemsa e histoquímica da NADPH-diaforase (NADPH-d) para evidenciar neurônios. Os preparados de membrana do cólon proximal foram analisados ao microscópio de luz (aumento de 400x). As imagens visualizadas em 120 campos de cada preparado de membrana foram capturadas por câmera digital acoplada ao microscópio. A área de cada campo visualizado ao microscópio equivaleu a 0,096 mm2. Os neurônios mientéricos foram quantificados e tiveram a área do pericário mensurada por meio de programa de análise de imagens. A normalidade dos dados foi testada usando o teste de Shapiro Wilk. Os resultados obtidos na mensuração da área do cólon proximal e na análise morfoquantitativa dos neurônios dos grupos C e E foram comparados usando teste t de Student (dados com distribuição normal) ou teste de Mann-Whitney (dados com distribuição livre). O peso dos animais e a área do cólon proximal não diferiram (p>0,05) entre os grupos E e C. Para a população total de neurônios, a densidade neuronal no grupo E (78,21 ± 12,57 neurônios/mm2 de cólon) não diferiu (p>0,05) do grupo C (77,84 ± 7,54 neurônios/mm2) e a área do pericário foi ~13,5% maior (p<0,05) para o grupo E. No grupo E, neurônios com área do pericário igual ou superior a 300 µm2 foram mais frequentes do que no grupo C. Para neurônios NADPH-d reativos, a densidade neuronal no grupo E (40,5 ± 5,88 neurônios/mm2) se manteve equiparada a do grupo C (41,0 ± 3,58 neurônios/mm2). Já, a área do pericário no grupo E diminuiu (p>0,05) ~7% em relação ao grupo C. Neurônios com área do pericário de dimensões igual ou inferior a 300 µm2 foram mai frequentes no grupo E do que no grupo C. Concluiu-se que no cólon proximal o 2,4-D na dose e tempo utilizados não altera a área do cólon proximal e nem a densidade neuronal mientérica, mas induz hipertrofia e atrofia nos neurônios da população total e da subpopulação reativa a NADPH-d, respectivamente.
Palavras-chave
Herbicida, intestino, plexo mientérico, neurotoxicidade, 2,4-D.
Title
Morpho-quantitative evaluation of myenteric neurons of the proximal colon of rats treated with 2,4 dichlorophenoxyacetic acid herbicide.
Abstract
The current symptoms of the neurotoxicity of the 2,4 dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) include stiffness, lethargy, anorexia, gastrointestinal irritation, nausea, vomiting and diarrhea and it is not known its effects on the myenteric plexus. Considering the use of this herbicide in the agriculture, the objective of this study was to evaluate the effects of 2,4-D ingestion on some quantitative and morphometric aspects of myenteric neurons of the proximal colon of rats. Sixty days old male rats (Rattus norvegicus) Wistar were used. For 15 days, a dose of 2,4-D (5 mg/kg/day) diluted in 1 mL of water was supplied through gavage to rats (n = 5) in the experimental group (group E). A control group of rats (n = 5) remained the same period without receiving 2,4-D. The animals were weighed daily to adjust the dose of 2,4-D and received Nuvital chow and water without restriction. The rats were euthanized with a lethal dose of thiopental (40 mg/kg). The proximal colon was removed and, after having the measured area, was subjected to the procedures for obtaining whole mount preparations stained by Giemsa technique and NADPH-diaphorase (NADPH-d) histochemistry to evidence neurons. The whole mount preparations of proximal colon were examined by light microscopy (400x increase). The images displayed in 120 fields of each whole mount preparation were captured by digital camera attached to a microscope. The area of each field viewed under a microscope amounted to 0.096 mm2. The myenteric neurons were quantified and had the cell body area measured through an image analysis software. The normality of data was tested using the Shapiro-Wilk test. The results of measuring the proximal colon area and the morphoquantitative analysis of neurons in groups C and E were compared using Student's t test (normally distributed data) or Mann-Whitney test (data with free distribution). The weight of the animals and the area of the proximal colon did not differ (p> 0.05) among the groups E and C. For the overall neurons population, the neuronal density in group E (78.21 ± 12.57 neurons/mm2 of proximal colon) did not differ (p> 0.05) of the group C (77.84 ± 7.54 neurons/mm2 of proximal colon) and the cell body area was ~13.5% larger (p <0.05) in group E. In the group E, neurons of the cell body with an area less than 300 µm2 were more frequent than in group C. For NADPH-d reactive neurons, the neuronal density in group E (40.5 ± 5.88 neurons/mm2) remained equivalent to group C (41.0 ± 3.58 neurons/mm2). Already, the area of the cell body in group E decreased (p> 0.05) ~7% in relation to the group C. Neurons of the cell body with an area of dimensions equal to or less than 300 µm2 were more often in group E than in the group C. It was concluded that in the proximal colon the 2,4-D at a dose and time used does not alter the area of the proximal colon and not the myenteric neuronal density, but induces hypertrophy and atrophy in the neurons of the overall population and reactive NADPH-d subpopulation, respectively.
Keywords
Herbicide, intestine, myenteric plexus, neurotoxicity, 2,4-D