Pesquisa
Contagem de bactérias do trato gastrointestinal de morcegos da espécie Molossus rufus e seu perfil de resistência aos antimicrobianos
Mestrado em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos
Autor: José Matheus Beltrami
Orientador: Luciana Kazue Otutumi
Defendido em: 22/02/2019
Resumo
Os morcegos são animais silvestres que compartilham o mesmo ambiente que o homem, sendo comumente encontrado no forro de residências. O fato de possuírem a característica de voo verdadeiro faz com que os mesmos consigam se locomover longas distâncias em um curto período de tempo, predispondo-os ao maior risco de contaminação por micro-organismos. Sendo assim, o objetivo do trabalho foi avaliar a contagem de bactérias do estômago e intestino delgado de morcegos da espécie Molossus rufus e o perfil de resistência aos antimicrobianos das enterobactérias isoladas. Foram capturados cinco morcegos da espécie Molossus rufus em forros de casas da microrregião de Cianorte - PR. A determinação da espécie a ser capturada foi determinada de acordo com sua proximidade e possível contato com abrigos habitados por humanos. Após a eutanásia, em câmara saturada com isofluorano, foram colhidas amostras do conteúdo estomacal por meio da utilização de um swab e do intestino delgado (duodeno, jejuno e íleo) foram colhidos aproximadamente 0,1 grama de tecido. Posteriormente, foi realizada a contagem de Lactobacillus spp. e enterobactérias do estômago e intestino delgado, isolamento das enterobactérias em ágar MacConkey, identificação das enterobactérias por meio do kit comercial da Newprov® e por fim foi avaliado o perfil de resistência aos antimicrobianos. Foram avaliados 19 antimicrobianos: ácido nalidíxico, amicacina, amoxicilina, amoxicilina + clavulanato, ampicilina, aztreonam, cefotaxima, cefoxitina, ceftazidina, ceftiofur, cefatriaxona, ciprofloxacina, cloranfenicol, enrofloxacina, gentamicina, imipenem, penicilina, tetraciclina, tobramicina. O valor do Índice de Resistência Múltipla aos Antimicrobianos (IRMA) dos isolados foi determinado pelo número de antibióticos que o isolado era resistente dividido pelo total de antibióticos testado. Verificou-se que a contagem de Lactobacillus spp. foi de 7,9×103 UFC/mL para o estômago e de 5,3×104 UFC/mL para o intestino, porém quando analisadas as amostras do intestino delgado, maior média de Lactobacillus spp. foram encontrados e variaram entre 1,05×105 a 1,2×107 UFC/g. Já em relação a contagem de enterobactérias verificou-se que para o estômago os valores variaram entre 7×102 a 2×104 UFC/mL enquanto para o intestino delgado este valor variou entre 3,9×103 e 2,7×105 UFC/g. Foram isoladas 19 enterobactérias, sendo 11/19 (57,9%) isoladas do estômago e 8/19 (42,1%) do intestino delgado. Em relação às espécies, 7/19 (36,84%) foram identificadas como Escherichia coli, 5/19 (26,32%) Cronobacter sakasakii, 3/19 (15,79%) Serratia liquefaciens e 1/19 (5,26%) de cada uma das espécies de Klebsiella aerogenes, Providencia alcalifaciens, Pantoea agglomerans e Klebsiella ozaenae onde foi observada a maior prevalência de Escherichia coli tanto para o estômago (36,4%) quanto para o intestino delgado (37,5%). Quanto à resistência aos antimicrobianos, todos os isolados foram resistentes à pelo menos dois antibióticos dos quatro antimicrobianos da classe das penicilinas (penicilina e amoxicilina) com exceção do isolado de K. ozaenae que foi resistente somente à penicilina. Quanto à avaliação do IRMA a média das amostras do estômago e intestino delgado apresentaram valor médio superior a 0,2 (0,224), porém quando verificados separadamente apenas o estômago apresentou este perfil (0,244). Conclui-se que a contagem de avaliação do perfil de resistência bacteriana da microbiota gastrointestinal de morcegos da espécie M. rufus agrega dados relevantes a morcegos desta espécie pois estudos avaliando os mesmos de morcegos da microrregião de Cianorte – PR ainda não foram registradas, não obstante a identificação de enterobactérias e a avaliação de seu perfil de resistência demonstra que estes morcegos além de apresentarem micro-organismos resistentes em seu organismo também podem estar ligados a dispersão dos mesmos visto que estes foram capturados em área urbana.
Palavras-chave
Enterobactéria. Molossideo. Morcego insetívoro. Quirópteros. Resistência Bacteriana.
Abstract
Bats are wild animals that share the same environment as the man, being commonly found in the lining of residences. The fact that they have the characteristic of true flight cause them to be able to move long distances in a short period of time, predisposing them a greater risk of contact with microorganisms. The objective of this study was to evaluate the count of bacteria of the stomach and small intestine of bats of the Molossus rufus species and the antimicrobial resistance profile of the isolated enterobacteriaceae. Five bats from Molossus rufus species were captured in house linings of Cianorte - PR microregion. The determination of the species to be captured was determined according to its proximity and possible contact with human-abutted shelters. After euthanasia, in a chamber saturated with isoflurane, samples were collected from the stomach contents was collected with swab and the small intestine (duodenum, jejunum and ileum) was collected approximately 0.1 gram of tissue. Subsequently, the count of Lactobacillus spp. and enterobacteria was made of the stomach and small intestine, isolation of enterobacteria on MacConkey agar, identification of enterobacteria using the Newprov® commercial kit, and finally the antimicrobial resistance profile was evaluated. 19 antimicrobials were evaluated: nalidixic acid, amikacin, amoxicillin, amoxicillin + clavulanate, ampicillin, aztreonam, cefotaxime, cefoxitin, ceftazidime, ceftiofur, ceftriaxone, ciprofloxacin, chloramphenicol, enrofloxacin, gentamicin, imipenem, penicillin, tetracycline, tobramycin. The value of the Multiple Antimicrobial Resistance (MAR) index of the isolates was determined by the number of antibiotics that the resistant isolate was divided by the total antibiotics tested. It was found that the lowest average Lactobacillus spp. count was found for the stomach was 7.9×103 CFU/mL and the highest was 5.3×104 CFU/mL when analyzed the small intestine samples, Lactobacillus spp. highest mean values were found and ranged from 1.05×105 to 1.2×107 UFC/g. In relation to the enterobacteria count, it was found that for the stomach the values ranged from 7×102 to 2×104 CFU/mL whereas for the intestine this value ranged from 3.9×103 to 2.7×105 CFU/g. Were isolated 19 enterobacteria, 11/19 (57.9%) being isolated from the stomach and 8/19 (42.1%) from the intestine. Regarding the species, 7/19 (36.84%) were identified as Escherichia coli, 5/19 (26.32%) Cronobacter sakasakii, 3/19 (15.79%) Serratia liquefaciens and 1/19 (5.26%) of Klebsiella aerogenes, Providencia alcalifaciens, Pantoea agglomerans and Klebsiella ozaenae, where the highest prevalence of Escherichia coli was observed for both the stomach (36.4%) and or small intestine (37.5%). Regarding antimicrobial resistance, all isolates were resistant to at least two antibiotics of the four antimicrobials of the class of penicillins (penicillin and amoxicillin), except for the isolate of K. ozaenae that was resistant to PEN only. In relation to the averages of the inhibition halos Escherichia coli and Cronobacter sakasakii the results showed that they had different behaviors since the averages were respectively 5.19mm and 15mm. Regarding the multiresistance profile, the stomach samples had a multiresistance profile, as the mean value of MAR was higher than 0.2 (0.244). It is concluded that the evaluation count of the bacterial resistance profile of the gastrointestinal microbiota of bats of the species M. rufus aggregates relevant data to bats of this species since studies evaluating the same of bats of the micro-region of Cianorte – PR have not been recorded, yet despite the identification of enterobacteria and the evaluation of its resistance profile demonstrates that these bats besides presenting resistant pathogens in their organism can also be related to the dispersion of the same since these were captured in urban area.
Keywords
Bacterial resistance. Chiroptera. Enterobacteria. Insectivorous bat. Molossidae.