Controle interno da pcr para o marcador molecular dominante Glu1-Dx5Dx2 em trigo

Mestrado em Biotecnologia Aplicada à Agricultura
Autor: Henderson Novo Heim
Orientador: Ivan Schuster
Defendido em: 29/08/2012

Resumo

Com o advento das técnicas moleculares, a seleção de genótipos superiores nos programas de melhoramento genético vegetal, tem sido realizada com o auxílio de marcadores moleculares. Reações de PCR em multiplex, ou seja, reações utilizando mais de um par de primers, possibilitam economia de tempo e reagentes. Nos programas de melhoramento genético de trigo a busca por materiais que apresentem uma melhor qualidade de farinha para panificação é de extrema importância para o sucesso na obtenção de materiais promissores. O marcador molecular dominante Glu1-Dx5 possui elevada relação com a qualidade de farinha para panificação. Este trabalho teve como objetivo validar um marcador microssatélite na mesma reação com o marcador Glu1-Dx5, para otimizar um controle interno na reação. A escolha do marcador microssatélite a ser usado na reação biplex foi realizada após a comparação de 14 marcadores quanto à formação de dímeros e grampos pelo alinhamento de suas sequências, utilizando o programa Netprimer. As condições da reação biplex foram otimizadas e foram amplificadas 77 amostras de DNA de trigo, cujos valores de qualidade de farinha eram conhecidos, com marcador Glu1-Dx5 na mesma reação que o marcador microssatélite Xbarc117. A observação dos fragmentos esperado foi um indicativo de que a reação em biplex funcionou. Pode-se evidenciar que a utilização de um primer com sequência não alvo juntamente com primer específico para determinação de gluteninas de alto peso molecular é possível e confiável.

Palavras-chave

PCR. Multiplex. gluteninas de alto peso molecular. Trigo. SSR.

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Title

Internal control of pcr for molecular marker Glu1-Dx5Dx2 dominant in wheat

Abstract

With the advent of molecular techniques, the selection of superior genotypes in plant breeding programs, has been performed with the aid of molecular markers. Multiplex PCR reactions, or reactions using more than one primer pair, allow savings in time and reagents. In breeding programs of wheat to search for materials that present a better quality of flour for baking is paramount to success in obtaining promising materials. The dominant molecular marker Glu1-Dx5 are highly related with wheat flour baking quality. re is a correlation between high molecular weight glutenin and breadmaking quality in wheat. This study aimed to validate a microsatellite marker in the same reaction with marker Glu1-Dx5 and to optimize internal control in the reaction. The choice of microsatellite molecular marker to be used in a biplex reaction was done after compared 14 markers by sequence aligning and dimers or hairpins formation, using the software Netprimer. The biplex PCR was optimized and 77 samples of wheat DNA, with knew values for wheat flour quality, with the markers Glu1-Dx5 in the same reaction as microsatellite marker Xbar117. The observation of the expected fragments was an indication that the biplex worked as expected. It can be showed that using a non-target marker together with a specific marker in the High Molecular Weight Glutenin is possible and confident.

Keywords

PCR. Multiplex. glutenin high molecular weight. Wheat. SSR