Detecção de misturas em sementes de soja por meio de marcadores moleculares e eletroforese capilar

Mestrado em Biotecnologia Aplicada à Agricultura
Autor: Carlos Magno Quirino de Farias
Orientador: Ivan Schuster
Defendido em: 29/08/2012

Resumo

A soja é uma das principais culturas do agronegócio brasileiro, havendo várias cultivares disponíveis no mercado. Uma empresa de sementes idônea deve disponibilizar para os agricultores um produto de elevada qualidade física, sanitária, fisiológica e genética. A avaliação da pureza genética em lotes de sementes se baseia, frequentemente, na observação de descritores morfológicos, os quais têm sido insuficientes para os testes de pureza. Uma alternativa é o emprego de marcadores moleculares codominantes. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a sensibilidade na detecção de misturas em sementes de soja, utilizando eletroforese capilar. Foi realizada uma simulação de contaminação de lotes de sementes com porcentagens de mistura de 1%, 2,5%, 5% e 10%. Foram utilizadas as cultivares CD 237RR e CD 219RR, sendo a última cultivar a contaminante. Três repetições de 1000 sementes foram utilizadas para cada porcentagem de mistura. De cada repetição de 1000 sementes, foram moídas 300 sementes e três porções de 50mg foram utilizadas para extração de DNA. Para a avaliação da sensibilidade de detecção de misturas foram utilizados marcadores para o gene da peroxidase em sementes de soja e marcadores microssatélite. A eficiência da utilização da eletroforese capilar foi comprovada, porém com porcentagens de mistura mais elevadas.

Palavras-chave

*Glycine Max*, pureza genética de sementes, SSR, peroxidase

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Title

Detection in soybean seed mixtures through molecular markers and capillary electrophoresis

Abstract

Soybean is an important crop of Brazilian agribusiness, with several cultivars available. A trusted seed company should provide for farmers seeds with high physical, sanitary, physiological and genetic quality. The assessment of genetic purity in seed lots is often based on the observation of morphological traits, which have been insufficient for purity tests. An alternative is the use of codominant molecular markers, which are suitable for the evaluation of genetic purity in seeds. The objective of this study was to evaluate the sensitivity in detecting mixtures in soybean seeds using capillary electrophoresis. We carried out a simulation of lots contamination percentage of seeds with a mixture of 1%, 2.5%, 5% and 10%. The cultivars CD 237RR and 219RR were used, being the last cultivar the contaminant. Three replicates of 1000 seeds were used for each percentage of the mixture. From each repetition of 1000 seeds, 300 seeds were milled and three portions of 50mg were used for DNA extraction. The molecular marker for peroxidase gene and microsatellite markers were used to evaluate the sensitivity to seed mixtures detection. The PCR products were separated by capillary electrophoresis and 3% agarose gel electrophoresis. The efficiency of capillary electrophoresis has been proven, but with higher percentages of mixture.

Keywords

*Glycine max*, seed genetic purity, SSR, peroxidase