Diagnóstico sorológico e caracterização molecular de leptospira spp. em sangue e urina de fêmeas bovinas de matadouros-frigoríficos

Mestrado em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos
Autor: Aliny Fernanda de Oliveira
Orientador: Daniela Dib Gonçalves
Defendido em: 31/03/2017

Resumo

A leptospirose é uma importante doença sócio-econômica acarretada pela Leptospira spp. que afeta homens e animais seja eles domésticos ou selvagens. Sua transmissão ocorre pelo contato direto ou indireto com a urina ou fluidos de animais infectados para Leptospira spp. e também pela deficiência de saneamento básico, condições inadequadas nas propriedades rurais e exposição a água contaminada. Os bovinos são considerados reservatórios assintomáticos desta enfermidade, sendo importante fonte de infecção por eliminar a bactéria de forma intermitente e por longo período pela urina possibilitando a exposição do agente etiológico aos trabalhadores do setor agropecuário, trabalhadores de frigorífico e moradores de área rural. O objetivo deste trabalho foi detectar anticorpos e DNA de Leptospira spp. em fêmeas bovinas provenientes de dois matadouros-frigoríficos da microrregião de Umuarama, Paraná, Brasil. Foram utilizados sangue e urina de 52 fêmeas bovinas mestiças com idade superior a 36 meses, provenientes de dois matadouros-frigoríficos. Para detecção de anticorpos anti-Leptospira spp. foi realizada a prova de soroaglutinação microscópica (SAM) e para a detecção de DNA foi realizada a reação em cadeia pela polimerase (PCR) e posterior sequenciamento da amostra. Na SAM, 22 (42,30%) amostras foram consideradas reagentes. Na Nested-PCR uma (1,92%) amostra amplificou 289 pb e posteriormente a mesma amostra amplificada novamente para o gene Sec Y com 549 pb. O sequenciamento parcial do gene sec Y caracterizou o produto obtido como L. borgpetersenii semelhante ao sorovar Hardjo genótipo Hardjobovis. Esta é a primeira confirmação molecular semelhante ao genótipo Hardjobovis pertencente à espécie L. borgpetersenii em urina de fêmeas bovinas mestiças com idade superior a 36 meses proveniente de matadouros-frigoríficos localizados na microrregião de Umuarama no estado do Paraná. Os resultados deste trabalho evidenciam a importância da associação do diagnóstico sorológico e molecular para a detecção de Leptospira spp. para o entendimento da epidemiologia desta enfermidade em bovinos da microrregião de Umuarama e posterior adoção de medidas de prevenção e ações de educação em saúde na esfera da saúde única evitando assim perdas econômicas relacionado ao rebanho e sociais relacionada a trabalhadores e meio ambiente.

Palavras-chave

Bovinos. Doença Ocupacional. Frigorífico. Leptospirose. Saúde Única.

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Title

Serological diagnosis and molecular characterization of Leptospira spp. in blood and urine of bovine herds from slaughterhouses slaughterhouses.

Abstract

Leptospirosis is an important socioeconomic disease caused by Leptospira spp. which affects men and animals whether domestic or wild. Its transmission occurs through direct or indirect contact with the urine or fluids of infected animals to Leptospira spp. as well as poor sanitation, inadequate conditions on rural properties and exposure to contaminated water. Bovine animals are considered asymptomatic reservoirs of this disease, being an important source of infection by eliminating the bacterium intermittently and for a long period of time through the urine, making it possible to expose the etiological agent to the workers in the agricultural sector, workers in the refrigerator and rural dwellers. The objective of this work was to detect antibodies and DNA of Leptospira spp. in bovine females from two slaughterhouses of the Umuarama microregion of Paraná, Brazil. Blood and urine of 52 mestizo bovine females older than 36 months were obtained from two slaughterhouses. For detection of anti-Leptospira spp. the microscopic sero-agglutination test (SAM) was performed and the polymerase chain reaction (PCR) and subsequent sequencing of the sample were performed for DNA detection. At SAM, 22 (42.30%) samples were considered as reagents. In Nested-PCR one (1.92%) sample amplified 289 bp and subsequently the same sample amplified again for the Sec Y gene with 549 bp. Partial sequencing of the sec Y gene characterized the product obtained as L. borgpetersenii similar to the serovar Hardjo genotype Hardjobovis. This is the first molecular confirmation similar to the genotype Hardjobovis belonging to the species L. borgpetersenii in urine of crossbred bovine females older than 36 months from slaughterhouses located in the Umuarama microregion in the state of Paraná. The results of this work evidenced the importance of the association of serological and molecular diagnosis for the detection of Leptospira spp. for the understanding of the epidemiology of this disease in cattle of the Umuarama microregion and subsequent adoption of preventive measures and actions of health education in the sphere of single health, thus avoiding economic losses related to the herd and social related to workers and the environment.

Keywords

Cattle. Occupational disease. Fridge. Leptospirosis. Single Health.