Pesquisa
Efeito da adição de ciclodextrina carregada com colesterol no ejaculado sobre a qualidade do sêmen congelado/descongelado de touros adultos da raça nelore
Mestrado em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos
Autor: Andre Giarola Boscarato
Orientador: Leonardo Franco Martins
Defendido em: 02/03/2015
Resumo
A criopreservação de sêmen bovino facilita a difusão e a disponibilidade de material genético a ser utilizado na inseminação artificial e produção de embriões. Durante o processo de criopreservação as membranas espermáticas são submetidas a uma variedade de injúrias, o que inclui estresse térmico, mecânico, químico e osmótico, que induzem a ocorrência de danos parcialmente irreversíveis ao espermatozoide, decorrentes de modificações da membrana plasmática, pela desestabilização da bicamada lipídica. A perda de colesterol da membrana plasmática de espermatozoides criopreservados pode causar uma capacitação prematura, reduzindo a viabilidade no trato reprodutivo feminino. A adição de colesterol pode ajudar a minimizar ou eliminar a transição de fase durante o processo de resfriamento. O colesterol pode ser facilmente incorporado ou extraído das membranas plasmáticas das células usando ciclodextrinas. As ciclodextrinas são oligossacarídeos cíclicos compostos por seis (α – ciclodextrina), sete (β- ciclodextrina) ou oito (γ- ciclodextrina) unidades de glicopiranose unidas por ligações α- (1,4), cujas moléculas se caracterizam por ter uma superfície externa hidrofílica e uma cavidade interna lipofílica. Modificando as ciclodextrinas com grupos metil ou hidroxipropil aumenta-se a sua solubilidade em água e, consequentemente, a sua capacidade para solubilizar compostos hidrofóbicos. Neste experimento avaliou-se o efeito da adição de ciclodextrina carregada com colesterol (CCC) previamente ao processo de criopreservação do sêmen de touros adultos da raça Nelore. Foram utilizados cinco ejaculados de três touros. Cada ejaculado foi dividido em três frações: grupo controle e adição de 2 mg e 3 mg de CCC para cada 120x106 espermatozoides. As amostras congeladas/descongeladas foram avaliadas quanto aos aspectos físicos e morfológicos sob microscopia óptica e a cinética espermática pelo sistema CASA (Computer Assisted Sperm Analysis). Foram utilizados o teste hiposmótico e as colorações supravital e de epifluorescência para a avaliação da integridade da membrana plasmática dos espermatozoides congelados/descongelados. Não foram observadas diferenças significativas entre os grupos controle e tratados com CCC em relação aos aspectos físicos e morfológicos, parâmetros de cinética espermática (MT-%, MP-%, VSL-μm/s, VCLμm/s, VAP-μm/s, RAP-%) e integridade de membrana plasmática dos espermatozoides (p>0,05). Conclui-se que a adição de CCC ao ejaculado de touros da raça Nelore previamente à criopreservação não melhora a qualidade do sêmen congelado/descongelado.
Palavras-chave
Bovinos. CASA. Criopreservação. Membrana plasmática. Testes complementares.
Title
Effect of addition of Cholesterol-loaded cyclodextrin in ejaculate on the quality of frozen/thawed semen of Nelore bulls
Abstract
Cryopreservation of bovine semen facilitates the dissemination and availability of genetic material to be used in artificial insemination and embryo production. During the sperm cryopreservation membranes are subjected to a variety of insults, including thermal stress, mechanical, chemical and osmotic that induce the occurrence of partially irreversible damage to spermatozoa, due to modifications of the plasma membrane bilayer destabilization of the lipid. Cholesterol loss of plasma membrane of cryopreserved spermatozoa can cause premature capacitation, reducing the viability in the female reproductive tract. The addition of cholesterol can help to minimize or eliminate the phase transition during the cooling process. Cholesterol can be easily incorporated into or extracted from the plasma membranes of cells using cyclodextrins. Cyclodextrins are cyclic oligosaccharides consisting of six (α - cyclodextrin), seven (β- cyclodextrin) or eight (γ- cyclodextrin) glucopyranose units linked by α- (1-4) linked whose molecules are characterized by having an outer surface hydrophilic and a lipophilic inner cavity. Modifying cyclodextrins with hydroxypropyl methyl groups increases the water solubility and hence its ability to solubilize hydrophobic compounds. This experiment evaluated the effect of adding cyclodextrin loaded with cholesterol (CLC) prior to semen cryopreservation of adult Nelore bulls. Five ejaculates three bulls were used. Each ejaculate was divided into three fractions: control group and addition of 2 mg and 3 mg of CLC for each 120.106 sperm cells. Frozen/thawed samples were evaluated physical and morphology under light microscopy and sperm kinetics by CASA (Computer Assisted Sperm Analysis). Hiposmotic test and the supravital and epifluorescence stains were used to evaluation of membrane integrity of frozen/thawed spermatozoa. Significant differences between the control group and treated with CLC were not observed in relation to physical and morphological features, sperm kinetic parameters (MT-%, MP-%, VSL-μm/s, VCLμm/s, VAP-μm/s, RAP-%) and plasma membrane integrity of spermatozoa (p> 0, 05). It is concluded that the addition of CCC to ejaculate of Nelore bulls prior to cryopreservation does not improve the quality of frozen / thawed semen.
Keywords
Bovine, CASA, Criopreservation, Plasmatic membrane, Complemental tests.