Efeito da adição de ciclodextrina carregada com colesterol no ejaculado sobre a qualidade do sêmen refrigerado de touros adultos da raça nelore

Mestrado em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos
Autor: Douglas Potratz Rodrigues
Orientador: Leonardo Franco Martins
Defendido em: 29/09/2016

Resumo

A perda de colesterol da membrana plasmática de células refrigeradas pode causar uma capacitação prematura, reduzindo a viabilidade de espermatozoides no trato reprodutivo feminino. O colesterol pode ser incorporado nas membranas plasmáticas das células usando ciclodextrinas. O complexo ciclodextrina-colesterol pode interagir com os componentes lipídicos da gema de ovo contidos no diluente, transferindo o colesterol a estes compostos ao invés da membrana espermática, fato que não ocorre quando se utiliza um diluente a base de lecitina de soja. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da adição de ciclodextrina carregada com colesterol (CCC) durante o resfriamento de espermatozoides de touros da raça Nelore com diluentes a base de gema de ovo e lecitina de soja sobre os aspectos físicos, morfológicos e integridade da membrana plasmática. Foram utilizados três touros da raça Nelore com idade média de três anos criados em regime de pastejo com suplementação mineral. Pelo método de eletroejaculação, foram obtidos quatro ejaculados de cada touro para serem submetidos a refrigeração. Cada ejaculado foi dividido em quatro tratamentos com e sem a adição de 2mg de CCC para cada 120x106 de espermatozoides com o diluente a base de gema de ovo, e com e sem a adição CCC para cada 120x106 de espermatozoides com o diluente a basde de lecitina de soja. A concentração espermática nas amostras diluídas foi ajustada para 30 milhões de espermatozoides totais por palheta de 0,25mL. Após a adição de CCC, foi feita homogeneização manual e os tubos foram mantidos por um período de incubação em banho maria por 15 minutos à 37ºC. Após o resfriamento das amostras foi realizada a análise da motilidade espermática retilínea progressiva e vigor espermático e a integridade física da membrana (coloração Supravital) nos tempos 0, 24 e 48 horas após a diluição do sêmen. Não houveram diferenças entre as médias do teste Supravital, motilidade espermática retilínea progressiva e vigor espermático entre os tratamentos nos tempos de 24 e 48 após a diluição (P>0,05). Conclui-se que a adição de CCC não influencia a qualidade espermática do sêmen resfrigerado nas condições que foram realizados o presente experimento.

Palavras-chave

Bovinos, Criopreservação, Espermatozoide, Membrana espermática.

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Title

Effect of addition of Cholesterol-loaded cyclodextrin in ejaculate on the quality of cooled semen of Nelore bulls.

Abstract

Cholesterol loss of spermatozoa plasma membrane of refrigerated semen can cause premature spermatozoa capacitation, reducing sperm viability in the female reproductive tract. The cholesterol may be incorporated into spermatozoa plasma membranes using cyclodextrins. The cyclodextrin - cholesterol complex can interact with the egg yolk lipid components contained in the diluent, transferring cholesterol to these compounds instead spermatozoa plasm membrane, which does not occur when using a diluent soya lecithin based. The objective of this study was evaluate the effect of adding cyclodextrin loaded with cholesterol (CLC) in the cooled semen of Nelore bulls with diluents egg yolk base and soy lecithin on the physical and morphological semen aspects and spermatozoa membrane integrity. Three adult Nelore bulls with an average age of three years raised in grazing system with mineral supplements were used. By electroejaculation four ejaculates were obtained from each bull to be subjected to refrigeration. Ejaculate was split into four treatments with and without the addition of 2mg CLC for each 120x106 spermatozoa with egg yolk base diluent, and with or without CLC added to each 120x106 spermatozoa with the lecithin soya base diluent. Sperm concentration of diluted sample was adjusted to 30 million total sperm per straw of 0.25 ml. After addition of the CLC, hand homogenization was performed and the tubes were maintained for a period of incubation in a water bath for 15 minutes at 37 ° C. After cooling process, it was performed mensuration of spermatozoa motility, spermatic vigor and physical integrity of the membrane (Supravital staining) at 0, 24 and 48 hours after dilution of the semen. There were no differences between the means of Supravital staining, sperm motility and spermatic vigor among treatments in 24 and 48 hours after dilution (P> 0.05). We conclude that the addition of CLC did not influence the quality of sperm -cooled semen in conditions that were conducted this experiment.

Keywords

Bovine, Criopreservation, Spermatic membrane, Spermatozoa.