Pesquisa
Efeito protetor e antimutagênico de extratos de Agaricus blazei
Mestrado em Biotecnologia Aplicada à Agricultura
Autor: Mylena Cristina Dornellas da Costa
Orientador: Nelson Barros Colauto
Defendido em: 27/02/2012
Resumo
Agaricus blazei é um fungo amplamente conhecido por suas propriedades medicinais com capacidade estimuladora do sistema imunológico, anticancerígena, antioxidante, protetora do sistema cardiovascular, redutora do colesterol entre outras. Entretanto poucos estudos têm avaliado a fase de maturação do basidiocarpo do fungo em relação à atividade biológica e a forma de extração dos princípios ativos. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito protetor e antimutagênico de extratos de basidiocarpos desidratados de Agaricus blazei em dois estágios de desenvolvimento (aberto e fechado) por diferentes processos de extração aquosa. Conídios de Aspergillus nidulans foram tratados com diferentes extratos de A. blazei e expostos à luz ultravioleta (UV) de comprimento de onda curto. A taxa de sobrevivência e a porcentagem de mutantes morfológicos foram utilizadas como parâmetros para avaliação do efeito protetor e antimutagênico deste basidiomiceto. Foi utilizada a linhagem U2-1 de A. blazei (antigo ABL 97/11) em dois estágios de desenvolvimento, basidiocarpo aberto (A) e basidiocarpo fechado (F), na forma de pó. Os extratos foram obtidos por três métodos extrativos: maceração, infusão e decocção, em dois tempos diferentes. Os extratos obtidos foram colocados em contato com uma suspensão contendo 106 conídios mL-1 de A. nidulans. A suspensão foi subdividida e tratada com o extrato na proporção de 1:1 de acordo com os seguintes tratamentos: a) mantido durante 15 h em geladeira e em seguida submetido à radiação UV (2 min); b) submetido inicialmente à radiação UV (2 min) e em seguida colocada em contato com os respectivos extratos por 15 h a 4 C. Como controle foi utilizada água destilada autoclavada (121 oC por 30 min), em substituição aos extratos de A. blazei. As suspensões foram diluídas e plaqueadas em meio completo de Pontecorvo e incubadas a 36 C, no escuro, por 72 h. Foram avaliados diferentes métodos extrativos na proporção de 5 g de pó em 45 mL de água: maceração (dois tratamentos: 1 dia ou 7 dias em água), decocção (dois tratamentos: 5min ou 15 min em água) e infusão (dois tratamentos: 30 min ou 60 min em água). Os extratos foram preparados em câmara de fluxo laminar, filtrados (filtro com porosidade de 0,22 µm) e armazenados a -20 °C. De forma geral, os conídios de A. nidulans irradiados com UV e tratados com os extratos de A. blazei apresentaram aumento da sobrevivência com diminuição na taxa de mutação. O extrato de basidiocarpo aberto ou fechado, bem como o método extrativo de maceração e de infusão, demonstraram vantagens em relação à sobrevivência e atividade antimutagênica. O método de infusão (30 min) foi mais efetivo que os demais, com capacidade de prevenção como reversão de mutações previamente estabelecidas pelo agente mutagênico UV. Concluiu-se que o método de extração mais efetivo na prevenção e reversão de mutações é o de infusão ou maceração para a extração dos princípios ativos dos basidiocarpos abertos ou fechados de A. blazei e que não houve diferença na atividade antimutagênica do micélio proveniente das duas fases de maturação do basidiocarpo.
Palavras-chave
métodos extrativos. *Agaricus brasiliensis. Aspergillus nidulans*. radiação ultravioleta. mutação.
Abstract
Agaricus blazei is a fungus widely known for its medicinal properties and its ability to stimulating the immune system, anticancer, antioxidant, protective of the cardiovascular system, lowering cholesterol among others. However few studies have evaluated the maturation phase of the basidiocarp of the fungus in relation to biological activity and the form of extracting active principles. Thus, the objective of this research was to analyze the protective capacity and antimutagenic of different forms of extracting basidiocarps of A. blazei in two stages of maturation. Conidia of Aspergillus nidulans extracts were treated with A. blazei and exposed to ultraviolet (UV) wavelength shorted. The survival rate and the percentage of morphological mutants were used as parameters to evaluate the protective and antimutagenic effect of this basidiomycete. A. blazei (former ABL 97/11) strain U2-1 was used on two developmental stages, oppened basidiocarp (A) and closed basidiocarp (F), in powder form. The extracts were obtained by three methods extractives: maceration, infusion and decoction, at two different times of preparation for each extraction method. The extracts obtained were placed in contact with a suspension containing 106 conidia mL-1 of A. nidulans. The suspension was divided and treated with the extract at a ratio of 1:1 according to the following treatments: a) kept in a refrigerator for 15 h and then subjected to UV radiation (2 min) and b) initially subjected to UV radiation (2 min) and then placed in contact with the extracts for 15 h at 4 C. Distilled water, autoclaved at 121 °C for 30 min, was used as control, replacing the extracts of A. blazei. The suspensions were diluted and plated on complete medium Pontecorvo and incubated at 36 C in the dark for 72 h. Different extractive methods of 5 g of mycelial powder in 45 ml of water were evaluated: maceration (two treatments: 1 day or 7 days in water), decoction (two treatments: 5min or 15 min in water) and infusion (two treatments: 30 min or 60 min in water). The extracts were prepared in a laminar flow hood, filtered (filter with porosity of 0.22 µm) and stored at -20 °C. In general, spores of A. nidulans UV irradiated and treated with the extracts of A. blazei showed increased survival with a decrease of the mutation rate. The opened or closed basidiocarp extract, as well as the maceration and infusion extraction method demonstrated advantages in relation to survival and antimutagenic activity. The infusion method (30 min) was more effective than the other treatments, with capacity for prevention and reversal of previously established by the mutagenic agent UV. It was concluded that the most effective extraction method in the prevention and reversal of mutations is the infusion or maceration to extract the active principles of the opened or closed basidiocarp of A. blazei and that there was no difference in the antimutagenic activity of the mycelium from the two basidiocarp maturation stages.
Keywords
extractive methods. *Agaricus blazei. Aspergulis nidulans*. ultraviolet radiation. mutation.