Pesquisa
Efeitos da ingestão de ácido 2,4 diclorofenoxiacético sobre os neurônios mientéricos do jejuno de ratos – análises quantitativa e morfométrica
Mestrado em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos
Autor: Oriel Prado Corrêa
Orientador: Sandra Regina Stabille
Defendido em: 19/03/2010
Resumo
As pesquisas sobre o herbicida ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) têm sido voltadas para o sistema nervoso central e não são conhecidos seus efeitos sobre o plexo mientérico. Este trabalho objetivou avaliar alguns aspectos morfométricos e quantitativos dos neurônios mientéricos do jejuno de ratos sob efeito do 2,4-D. Foram utilizados 10 ratos (Rattus norvegicus) machos Wistar de 60 dias de idade. Os animais foram mantidos em caixas plásticas, em sala com ciclo de iluminação artificial controlado para 12h claro/12h escuro e temperatura ambiente de 22ºC, pelo período de 15 dias. Os animais foram pesados diariamente e distribuídos em dois grupos (n = 5/grupo). O grupo experimental (grupo E) foi formado por animais que receberam 5 mg/kg /dia de 2,4-D diluído em 1 mL de água durante 15 dias, via gavagem. O grupo controle (grupo C) foi constituído por animais que receberam pelo mesmo período 1 mL de água via gavagem. Para todos os animais foram fornecidas ração e água sem restrição. Os animais foram eutanasiados com dose letal de tiopental. Posteriormente, cada animal foi laparatomizado e o jejuno foi retirado e decalcado em papel branco. Os decalques foram escaneados para determinação da área do jejuno (mm2) utilizando-se analisador de imagens. Em seguida, o jejuno de cada animal foi seccionado para obtenção de dois segmentos. O segmento proximal destinou-se aos procedimentos pertinentes à técnica de coloração de Giemsa e o segmento distal para a histoquímica da NADPH diaforase (NADPH-d). Os neurônios foram visualizados em preparados de membrana do jejuno obtidos por microdissecção, ao estereomicroscópio, retirando-se a túnica mucosa e tela submucosa e preservando-se as túnicas serosa e muscular. A quantificação dos neurônios foi realizada em imagens obtidas a partir de 120 campos microscópicos. Os neurônios quantificados tiveram, posteriormente, mensurada a área do pericário por meio de analisador de imagens. Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão (dados com distribuição normal) e como mediana e percentis 25 e 75 (dados com distribuição livre) e comparados pelo teste t de Student e Mann Withney, respectivamente. Também os neurônios foram classificados em intervalos de classe de 50 µm2 segundo as dimensões do pericário. O peso dos animais e a área do jejuno não diferiram (p>0,05) entre os grupos E e C indicando que o 2,4-D não interferiu no peso dos animais e no tamanho do jejuno. Para os neurônios evidenciados pela técnica de Giemsa, a densidade neuronal/mm2 de jejuno no grupo E se manteve equiparada ao grupo C sem diferença significativa (p>0,05). A área do pericário no grupo E foi 9% menor (p<0,05) do que no grupo C. Entre os neurônios NADPH-d positivos, a densidade neuronal/mm2 de jejuno não foi alterada quando comparados os grupos E e C. A área do pericário no grupo E foi maior representando um aumento significativo (p>0,05) de ~5% no tamanho do neurônio no grupo E quando comparado ao grupo C. Concluiu-se, que na dosagem de 5 mg/Kg e por 15 dias o 2,4-D não promove morte neuronal e induz hipertrofia de neurônios NADPH-d positivos e atrofia da população total de neurônios.
Palavras-chave
2,4-D, intestino, sistema nervoso entérico, herbicida
Title
Effects of the ingestion 2,4 dichlorophenoxyacetic acid on jejunal myenteric neurons in rats – Quantitative and morphometric analyses.
Abstract
Most research studies verifying the effects of the 2,4 dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) have been focused on the central nervous system such that its effects on the enteric nervous system are still unknown. The objective of the present study was to verify the effects of 2,4-D on some morphometric and quantitative aspects of myenteric neurons in the rat jejunum. Ten 60-day-old male Wistar rats (Rattus norvegicus) were used for this study. Animals were housed in plastic boxes for 15 days, in a room with controlled artificial light on a 12 h light/ dark cycle and temperature set at 22°C. The animals were weighed daily and were assigned to two groups (n=5/group). The experimental group (group E) consisting of animals that received 5.0 mg/kg /day of 2,4-D diluted in 1 mL of water via gavage for 15 days. The control group (group C) consisting of animals that received 1 mL of via gavage and for the same period. All animals were provided with rations and water without restriction. The animals were euthanased with a lethal dose of thiopental. Thereafter, each animal was laparotomised and the jejunum was removed and its outline was traced onto white paper. These tracings were scanned to determine the area of the jejunum (mm2) using an image analyzer. The jejunum of each animal was sectioned to obtain two segments. The proximal segment was used for procedures pertaining to the Giemsa staining technique, and the distal segment was used for the NADPH diaphorase histochemistry (NADPHd). The neurons were visualized in jejunum whole mount preparations obtained microdissected under stereomicroscopy to remove and dispose of the mucosa and submucosa. The serum and muscular layers were preserved. The quantification of the neurons was accomplished in images obtained from 120 microscopic fields by whole mount preparation. The cell body area (µm2) was measured for all neurons counted previously in the whole mount preparation of each animal’s jejunum using image-analysis program. The results were expressed as average ± standard deviation (data with normal distribution) and median and the 25th and 75th percentiles (P25; P75) (data with free distribution) and compared by the test t of Student and Mann Withney, respectively. The animals' body weights and the jejunum area did not differ (p>0.05) between groups C and E indicating that the 2,4-D did not affect the animal's body weight and jejunum area. Among the neurons revealed by the Giemsa technique the neuronal density/mm2 of the jejunum in the group E did not differ (p> 0.05) from that in group C. The cell body area in the group E it was 9% smaller (p <0.05) than in the group C. Among the positive NADPH-d neurons, the neuronal density neuronal/mm2 of the jejunum was not altered when compared the groups E and C. The cell body area in the group E was larger representing a significant increase (p>0.05) of ~5% in the size of the neuron in the group E when compared to the group C. Ended, that in the dosage of 5 mg/Kg and for 15 days, the 2,4-D don't promote neuronal death, but induces hypertrophy of NADPHd+ neurons and atrophy of the neuronal overall population.
Keywords
2,4-D, intestine, enteric nervous system, herbicide