Fungos endofíticos de brunfelsia uniflora: isolamento, criopreservação, atividades enzimática e antioxidante

Mestrado em Biotecnologia Aplicada à Agricultura
Autor: Sara Jane Marsola
Orientador: Giani Andrea Linde Colauto
Defendido em: 20/04/2016

Resumo

Brunfelsia uniflora (Pohl.) D. Don (Solanaceae) conhecida como manacá de cheiro é encontrada no Brasil. Diferentes espécies deste gênero são utilizadas por povos indígenas como antidiurético, anti-reumático, anti-sifilíco, depurativo, diurético, emético, vermífugo, purgativo entre outros. Já foram isolados princípios ativos como benzenóides, terpenos, lactonas, alcaloides e ácido cafeico. Os fungos endofíticos são microrganismos encontrados no interior de tecidos vegetais, estes podem interagir com as plantas, de forma mutualística. Estudos relacionam sinergismo entre a produção de compostos por plantas e seus fungos endofíticos, assim demonstrando alternativa para obtenção de substâncias bioativas. Apesar dos inúmeros estudos que se baseiam na identificação de compostos fitoquímicos das espécies vegetais de Brunfelsia não existem relatos sobre a diversidade de microrganismos endofíticos nestas plantas. Desta forma, este trabalho teve por objetivo isolar, criopreservar e determinar a atividade de celulase, lacase e antioxidante de fungos endofíticos isolados do caule de B. uniflora. Fungos endofíticos foram isolados do caule de B. uniflora, crescidos em grãos de trigo, submersos em solução aquosa de sacarose a 15% e criopreservados à -75% por 1 e 6 meses. Foi realizado teste qualitativo para atividade de celulase em meio a base de carboximetilcelulose e avaliação de atividade enzimática quantitativa para lacase pela oxidação de solução 2,2’- azino-bis (3-etilbenzoatiazolina-6-sulfonato). Os fungos foram crescidos em meio líquido extrato de malte e a biomassa micelial separada. Foi preparado um extrato metanólico e determinada a atividade antioxidante por DPPH, FRAP e quantificação de fenóis totais. Foram isolados 46 fungos endofíticos do caule de B. uniflora que formaram 24 grupos com morfotipos semelhantes. Os fungos apresentaram viabilidade após um e seis meses de criopreservação à -75ºC. Dos isolados, 8 fungos endofíticos apresentaram atividade de celulase. O pico de produção de lacase foi observado no isolado CE23 no 7º dia de cultivo. 12 fungos endofíticos apresentaram atividade antioxidante para DPPH, FRAP e fenóis totais.

Palavras-chave

preservação de microrganismos; plantas medicinais; enzimas; diversidade; simbiose.

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Title

Endophytic fungi of Brunfelsia uniflora: isolation, cryopreservation, antioxidant activity and enzyme

Abstract

Brunfelsia uniflora (Pohl.) D. Don (Solanacea) known as manacá de cheiro is found in Brazil. Different species of this genus are used by indigenous people as antidiuretic, anti-rheumatic, anti-syphilitic, depurative, diuretic, emetic, vermifuge, purgative, and others. Were isolated many active ingredients, as benzenoid, terpenes, lactones, alkaloids and caffeic acid. Endophytic fungi are microorganisms, and is found inside plants tissues, they may interact with plants, in mutualistic way. Studies related synergism between the production of compounds by plants and their endophytic fungi, thus demonstrating alternative for obtaining bioactive substances. Although of numerous studies wich are based on identification of phytochemical compounds of plant species of Bunfelsia, there are no reports about the diversity of endophytic microorganisms in these plants. Thus, this work aimed to isolate, cryopreserve and determinate the cellulase activity, laccase and antioxidant from B. uniflora stem. Endophytic fungi were isolated from B. uniflora stem, grown in wheat, submerged in aqueous solution of 15% sucrose and cryopreserved at -75ºC for 1 and 6 month. It conducted qualitative test for activity cellulase in carboxymethylcellulose base and an enzyme quantitative activitie evaluation of laccase by the oxidation of 2,2' -azino-bis- (3-etilbenzoatiazolina-6-sulfonate) solution. The fungi were grown in liquid malt extract and the mycelial biomass was separated. It was prepared an metanoic extract and determinated the antioxidant activity by DPPH, FRAP and quantification of total fenols. They were isolated 46 endophytic fungi from the Brunfelsia uniflora stem that formed 24 groups with similar morphotypes. The fungi showed viability after one to six months of cryopreservation in -75ºC. Of the isolateds, 8 endophytics fungi showed cellulase activity. The summit production of laccase isolated in CE23 was observed on 7th day of production. 12 endophytic fungi showed antioxidant activity to DPPH, FRAP and total phenols.

Keywords

preservation of microorganisms; medicinal plants; enzymes; diversity; symbiosis.