Pesquisa
Identificação Putativa e atividades antioxidante, antiproliferativa e citotóxica do Extrato Bruto das folhas de Nectandra Megapotamica
Mestrado em Biotecnologia Aplicada à Agricultura
Autor: Edneide Bezerra da Cruz Oliveira
Orientador: Zilda Cristiani Gazim
Defendido em: 03/05/2024
Resumo
As plantas constituem uma fonte alternativa na terapia, com destaque para a espécie Nectandra megapotamica (Lauraceae), nativa da região sul do Brasil, conhecida popularmente como Canelinha. As folhas apresentam atividades antimicrobiana e anti-leishmania, fotoprotetora e antioxidante, na medicina popular as cascas do tronco são utilizadas na forma de chás para cicatrização de feridas que podem estar relacionadas a úlceras produzidas pela leishmaniose. Neste sentido, este projeto teve por objetivo avaliar o potencial antioxidante, anti-inflamatório, antiprolifertivo e protetora solar do extrato bruto das folhas de N. megapotamica. A metodologia consistiu na coleta das folhas e no preparo do extrato bruto (EB) pela técnica de maceração dinâmica com esgotamento do solvente (álcool etílico 70% v v-1). A análise da composição química foi realizada por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas de alta resolução (UHPLC-MS). Como atividades biológicas, foram realizados os ensaios anti-inflamatórios pela determinação do óxido nítrico (ON), utilizando linhagem de macrófagos RAW 264.7 de camundongos. A atividade antitumoral foi determinada em linhagens de células tumorais humanas: AGS (adenocarcinoma gástrico), Caco-2 (adenocarcinoma colorretal), MCF-7 (adenocarcinoma de mama) e NCI-H460 (carcinoma pulmonar). A atividade citotóxica foi avaliada em células não tumorais utilizando células VERO (células epiteliais do rim de macaco). O extrato bruto foi avaliado quanto à atividade antioxidante celular (AAC) em culturas de células de macrófagos de camundongo (RAW 264,7). Também foram determinados o teor de fenois totais (FT), flavonoides e fator de proteção solar (FPS). Nos EB foram identificados ácido hidroxibenzóico, eriodictyol, quercetina, kaempferol, isoquercetina, rutina, quercitrina, eriodictyol, ácido quínico, kaempferol 3glucopiranosideo e catequina. A concentração do extrato responsável por inibir 50% da produção de óxido nítrico foi ˃ 400 µg mL-1. A atividade antiproliferativa contra as linhagens tumorais foi: AGS (GI50 83 µg mL-1), Caco-2 (GI50 173 µg mL-1), MCF7 (GI50 246 µg mL-1) e NCI-H460 (GI50 205 µg mL-1). A atividade antioxidante celular foi ˃ 2.000%. O índice de seletividade (IS) variou de 1,00 a 2,78. Os teores de fenois totais (FT) variaram de 43,88 a 149,57 µg de equivalente de ácido gálico/mg de EB. Os teores de flavonoides encontrados nas concentrações testadas variaram de 119,07 a 163,54 µg equivalentes à quercetina/mg de EB). O Fator de Proteção Solar (FPS) nas concentrações testadas (1,0 a de 0,25mg/mL) foi de 3,76 a 15,65. O Extrato bruto das folhas demonstrou potencial antioxidante celular, apresentou o melhor resultado antiproliferativo frente à célula tumoral AGS dentre as células testadas, e demonstrou fator de proteção solar. Os resultados encontrados nesta pesquisa antioxidante e fotoprotetora desta planta, além de agregar valor às folhas que geralmente são descartadas. Este estudo abre novas perspectivas sobre a utilização do extrato das folhas de N. megapotamica com potencial para desenvolvimento de produtos.
Palavras-chave
Antioxidante, Canela Preta, Canelinha, Fator de proteção Solar, Lauraceae
Title
Putative Identification and antioxidant, antiproliferative and cytotoxic activities of the Crude Extract of Nectandra Megapotamica leaves
Abstract
Plants constitute an alternative source of therapy, with emphasis on the species Nectandra megapotamica (Lauraceae), native to the southern region of Brazil, popularly known as Canelinha. The leaves have antimicrobial and anti-leishmanial activities, and in folk medicine the trunk barks are used in the form of teas to heal wounds that may be related to ulcers produced by leishmaniasis. In this sense, this project aimed to evaluate the antioxidant, anti-inflammatory and antiproliferative potential of the crude extract of N. megapotamica leaves. The methodology consisted of collecting the leaves and preparing the crude extract (EB) using the dynamic maceration technique with solvent exhaustion (ethyl alcohol 70% v v-¹). Chemical composition analysis was carried out using ultra-performance liquid chromatography coupled to high-resolution mass spectrometry (UHPLC-MS). As biological activities, anti-inflammatory assays were carried out by determining nitric oxide (NO), using mouse macrophage line RAW 264.7. Antitumor activity was determined in human tumor cell lines: AGS (gastric adenocarcinoma), Caco-2 (colorectal adenocarcinoma), MCF-7 (breast adenocarcinoma) and NCI-H460 (lung carcinoma). Cytotoxic activity was evaluated in non-tumor cells using VERO cells (monkey kidney epithelial cells). The crude extract was evaluated for cellular antioxidant activity (AAC) in mouse macrophage cell cultures (RAW 264.7). The content of total phenols (TF), flavonoids and sun protection factor (SPF) were also determined. Hydroxybenzoic acid, eriodictyol, quercetin, kaempferol, isoquercetin, rutin, quercitrin, eriodictyol, quinic acid, kaempferol 3 glucopyranoside and catechin were identified in EB. The concentration of the extract responsible for inhibiting 50% of nitric oxide production was ˃ 400 µg mL-1. The antiproliferative activity against tumor lines was: AGS (GI50 83 µg mL-1), Caco-2 (GI50 173 µg mL-1), MCF7 (GI50 246 µg mL-1) and NCI-H460 (GI50 205 µg mL- 1). Cellular antioxidant activity was ˃ 2,000%. The selectivity index (SI) ranged from 1.00 to 2.78. Total phenolic (TF) contents ranged from 43.88 to 149.57 µg of gallic acid equivalent/mg of EB. The flavonoid contents found in the tested concentrations ranged from 119.07 to 163.54 µg quercetin equivalents/mg of EB). The Sun Protection Factor (SPF) at the concentrations tested (1.0 to 0.25mg/mL) was from 3.76 to 15.65. The crude extract of the leaves demonstrated cellular antioxidant potential, presented the best antiproliferative result against the AGS tumor cell among the cells tested, and demonstrated a sun protection factor. The results found in this research confirm the popular use of this plant, in addition to adding value to leaves that are generally discarded. This study opens new perspectives on the use of N. megapotamica leaf extract with potential for product development.
Keywords
Antioxidant, Black Cinnamon, Cinnamon, Fator de Proteção Solar, Lauraceae.