Pesquisa
Isolamento de enterobactérias de uma integração de frango de corte: determinação do perfil de resistência aos antimicrobianos e estudo da atividade antimicrobiana de Pereskia aculeata Mill
Doutorado em Ciência Animal com Enfase em Produtos Bioativos
Autor: Taniara Suelen Mezalira
Orientador: Luciana Kazue Otutumi
Defendido em: 17/02/2023
Resumo
A avicultura se destaca devido à produção em larga escala e baixo custo. Durante a criação, as aves estão sujeitas à contaminação por bactérias patogênicas, principalmente enterobactérias. O uso de antimicrobianos tem sido uma prática rotineira no tratamento das infecções bacterianas, mas que tem contribuído para o surgimento de cepas resistentes. O objetivo do trabalho foi avaliar o perfil de resistência aos antimicrobianos e produção de β-lactamases de espectro estendido (ESBL) em enterobactérias isoladas de diferentes etapas de criação de frangos de corte, e determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) do extrato aquoso de Pereskia aculeata Mill. frente à estas enterobactérias. No primeiro experimento, foram colhidas 20 amostras de suabe cloacal de frangos de corte com idade entre 23 e 34 dias de dois grupos (A e B) de produtores de frangos de corte classificados de acordo com a conversão alimentar. No segundo, foram selecionados dois núcleos de matrizes de frango de corte em período de produção de ovos. De cada núcleo, foram colhidas 20 amostras de suabe cloacal de matrizes de frangos de corte, 10 amostras de suabe da casca do ovo incubável, 10 de suabe cloacal de pintainhos de um dia e 10 amostras de suabe cloacal de frangos em crescimento. As amostras foram processadas e as enterobactérias isoladas foram submetidas ao teste de difusão em disco, para avaliar a sensibilidade aos antimicrobianos. Em ambos os experimentos, foi utilizado o teste sinérgico do duplo disco para a identificação de cepas produtoras de ESBL e feito a determinação da CIM do extrato aquoso de Pereskia aculeata Mill. por meio do método de microdiluição em caldo. Para isso, o extrato aquoso foi preparado a partir das folhas secas pelo método decocção, sendo posteriormente liofilizado e analisado quimicamente por cromatografia líquida. Os resultados do experimento 1, mostraram que 55% das enterobactérias isoladas apresentaram resistência a três ou mais classes de antimicrobianos, com 45% dos isolados produtores de ESBL, não havendo diferenças (P>0,05) entre as amostras de produtores A e B. Em apenas um isolado de E. coli do produtor A houve inibição de crescimento na CIM de 12.000 µg/mL do extrato aquoso. Nos resultados do experimento 2, verificou-se maior perfil de resistência para antimicrobianos da classe das quinolonas e beta-lactâmicos nas enterobactérias isoladas da matriz A e B, respectivamente, porém não foram encontradas diferenças (P>0,05) em relação à origem. A
detecção de cepas produtoras de ESBL foi encontrada em 18% dos isolados oriundos da matriz A e 20% da matriz B, sendo que a classe dos beta-lactâmicos apresentou diferenças (P<0,05) quando se relacionou o perfil de resistência e a produção de ESBL para a maioria dos antimicrobianos. A CIM de 12.000 µg/mL (fraca atividade) foi determinada em 8/100 isolados, no entanto, salienta-se que nenhum desses isolados apresentou perfil ESBL e apenas um apresentou perfil de multirresistência. Conclui-se que as enterobactérias isoladas de diferentes etapas de criação de uma integração de frangos de corte, apresentam perfil de multirresistência e ESBL e foram fracamente inibidas pelo extrato aquoso de Pereskia aculeata Mill.
Palavras-chave
Beta-lactâmicos. Beta-lactamases de espectro estendido (ESBL). Concentração Inibitória Mínima. Ora-pro-nóbis. Quinolonas.
Title
Isolation of enterobacteria from a broiler production: determination of the antimicrobial resistance profile and study of the antimicrobial activity of Pereskia aculeata Mill.
Abstract
Poultry farming stands out due to its large-scale production and low cost. During rearing, birds are subject to contamination by pathogenic bacteria, mainly enterobacteria. The use of antimicrobials has been a recurrent practice in the treatment of bacterial bacteria, but it has contributed to the infection of resistant strains. The objective of this work was to evaluate the profile of resistance to antimicrobials and production of modified-spectrum β-lactamases (ESBL) in enterobacteria in detail at different stages of broiler rearing, and to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of the aqueous extract of Pereskia aculeata Mill. against these enterobacteria. In the first experiment, 20 samples of cloacal swab from broilers aged between 23 and 34 days were selected from two groups (A and B) of broiler producers classified according to feed conversion. In the second, two nuclei of broiler breeders in the egg production period were selected. From each nucleus, 20 samples of cloacal swab from broiler breeders, 10 samples of cloacal swab from hatching eggshells, 10 samples of cloacal swab from day-old chicks and 10 samples of cloacal swab from growing chickens. The samples were processed and the isolated enterobacteria were submitted to the disk diffusion test, to assess sensitivity to antimicrobials. In both experiments, the double-disk synergistic test was used to identify ESBL-producing strains and the MIC of the aqueous extract of Pereskia aculeata Mill was determined. by means of the broth microdilution method. For this, the aqueous extract was prepared from the dried leaves by the decoction method, being subsequently lyophilized and chemically analyzed by liquid chromatography. The results of experiment 1 showed that 55% of the isolated enterobacteria showed resistance to three or more classes of antimicrobials, with 45% of the isolates producing ESBL, with no differences (P>0.05) between the samples of producers A and B. In only one E. coli isolate from the producer A there was growth inhibition at the MIC of 12,000 µg/mL of the aqueous extract. In the results of experiment 2, there was a greater profile of resistance to antimicrobials of the class of quinolones and beta-lactams in enterobacteria isolated from matrix A and B, respectively, but no differences were found (P>0.05) in relation to the origin. The detection of ESBL-producing strains was found in 18% of the isolates from matrix A and 20% from matrix B, and the class of beta-lactams showed differences (P<0.05) when relating the resistance profile and the production of ESBL for most antimicrobials. The MIC of 12,000
µg/mL (weak activity) was determined in 8/100 isolates, however, it should be noted that none of these isolates showed an ESBL profile and only one showed a multidrug resistance profile. It is concluded that the enterobacteria isolated from different rearing stages of a broiler integration, present a profile of multiresistance and ESBL and were weakly inhibited by the aqueous extract of Pereskia aculeata Mill.
Keywords
Beta-lactams. Extended-spectrum beta-lactamase (ESBL). Minimum Inhibitory Concentration. Ora-pro-nobis. Quinolones.