Pesquisa
Monitoramento do perfil de resistência de Staphylococcus sp. e detecção do gene mecA de Staphylococcus aureus isolados de vacas em lactação em uma propriedade leiteira do Município de Umuarama – PR
Mestrado em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos
Autor: Renata Olivotto Agostinis
Orientador: Lisiane de Almeida Martins
Defendido em: 27/02/2014
Resumo
Os Staphylococcus sp. são os maiores causadores de mastite bovina, sendo o Staphylococcus aureus o mais patogênico. O tratamento é realizado com antibióticos, e pode ser prejudicado quando os micro-organismos são resistentes a esses fármacos. Os beta-lactâmicos frequentemente utilizados já não são tão eficientes, devido a cepas de MRSA (Staphylococcus aureus meticilina resistentes), portadores do gene mecA que modifica as proteínas ligantes de penicilina (PBP’s) resultando em resistência a diversos antibióticos. O presente trabalho teve como objetivo verificar a frequência de Staphylococcus sp. causadores de mastite, avaliar o perfil de suscetibilidade de diversos antibióticos frente a esses isolados, além de detectar o gene mecA em Staphylococcus aureus em um rebanho leiteiro de uma propriedade em Umuarama-PR. Foram utilizadas 189 amostras isoladas de vacas em lactação, colhidas mensalmente durante sete meses (variação de 18 a 35 animais/mês), por pools do leite dos tetos cada vaca, totalizando uma amostra por animal. As amostras adequadamente armazenadas e enviadas ao laboratório de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Pública do Mestrado em Ciência Animal da Universidade Paranaense. Para análise microbiológica as amostras foram semeadas em Agar base acrescido de 5% de sangue ovino desfibrinado, encubadas em estufa a 37º C por até 72 horas e após crescimento foi realizada a identificação das colônias. Para o antibiograma dos Staphylococcus sp. (84) foram utilizados os antibióticos gentamicina, enrofloxacina, sulfonamida, penicilina, ampicilina, oxacilina, cefalotina, ceftiofur, clindamicina, tetraciclina, eritromicina e sulfa+trimetropim. Todos os Staphylococcus aureus (10) foram submetidos a PCR para detecção do gene mecA, ao teste para detecção da produção de beta-lactamase e determinação da concentração inibitória mínima (CIM) pelo método de E-test.De 189 amostras, 30,68% não houve crescimento, 39,15% foram Staphylococcus coagulase negativa, 5,29% Staphylococcus aureus, 7,40% Streptococcus e 17,46% outros micro-organismos (BGP, BGN, Corynebacterium e levedura). Os antibióticos que apresentaram maiores níveis de resistência frente aos isolados foram: sulfonamida, penicilina, ampicilina e tetraciclina; os que apresentaram maior sensibilidade frente aos isolados foram sulfa+trimetropin, gentamicina, ceftiofur e enrofloxacina. Foram encontrados 86,41% de Staphylococcus sp. e 60% de Staphylococcus aureus multirresistentes. Todas as amostras de S. aureus foram negativas para o gene mecA porém positivas para beta-lactamase.
Palavras-chave
Antibiograma. beta-lactamase.mastite.mecA.multirresitência. PCR.
Title
Staphylococcus sp. resistance profile monitoring and mecA gene detection from Staphylococcus aureus taken from lactating cows in a dairy farming property from Umuarama-PR
Abstract
The Staphylococcus sp. are the most causing agents in bovine mastitis, being Staphylococcus aureus the most pathogenic. The treatment is procedure with antibiotics, but it can be harmed when the microorganisms are resistant to these drugs. The beta-lactams, frequently used, are not so efficient nowadays, due to the MRSA (Meticilin resistant Staphylococcus aureus) strains, which carry the mecA gen, that cause the modification of the penicillin binding proteins (PBPs), resulting in resistance to many antibiotics. The present paper aims to verify the frequency of the mastitis causing Staphylococcus sp., trace the susceptibility profile to many antibiotics to these, and detect the mecA gen in a milk producing herd in a dairy farm property in Umuarama-PR. 189 isolated samples were taken from lactating cows, collected monthly in a seven months range (fluctuation between 18 to 35 animals per month), by pools from the udders from each cow, with a total of one sample per animal. The samples were accordingly stored and sent to the Preventive Veterinary Medicine and Public Health laboratory, from the Master’s degree in Animal Health, at Universidade Paranaense. To the microbiological analysis, the samples were seeded in base agar plus 5% defibrinated sheep blood, incubated at 37º C (98.6° F) for 72 hours, and after the colony growth, these were identified. To the Staphylococcus sp.’s antibiogram (84), the antibiotics used were: Gentamicin, enrofloxacin, sulfonamide, penicillin, ampicillin, oxacilline, cefalotin, ceftiofure, clindamycin, tetracycline, eritromicin and sulpha+trimethopim.All of the Staphylococcus aureus(10) were submitted to the PCR process to detect the mecA gene, to the beta-lactamase production detection test and also to minimum inhibitory concentration to the E-test drugs. 189 samples were collected, from these, 30,68% showed no growth, 39,15% of the Staphylococcus were negative to the coagulase test, 5,29% Staphylococcus aureus, 7,40% Streptococcus and 17,46% other micro-organisms (BGP, BGN, Corynebacterium and yeast). The antibiotics that showed higher resistance levels were sulfonamide, penicillin, ampicillin and tetracycline, meanwhile, the higher sensibility levels were sulpha+trimethopim, gentamicin, ceftiofure and ennrofloxacin. In the samples, 86,41% of the Staphylococcus sp. and 60% of the Staphylococcus aureus were multiresistant. All of the S. aureus samples were negative to the mecA gene, but positive to the beta-lactamase test.
Keywords
antibiogram. beta-lactamase.mastitis.mecA.multiresitance. PCR.