Pesquisa
Perfil biológico de Staphylococcus spp. isolados de abatedouro bovino e sua sensibilidade ao óleo essencial de Rosmarinus officinalis.
Mestrado em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos
Autor: Karolaine Bezerra
Orientador: Lidiane Nunes Barbosa
Defendido em: 08/03/2022
Resumo
A carne por ter condições favoráveis para multiplicação de microrganismos patogênicos e deteriorantes, gera a necessidade que seus manipuladores tenham o treinamento e conscientização sobre as boas práticas de fabricação e condições higiênico sanitárias, já que pode interferir na qualidade do alimento, sendo um grande problema para a saúde pública. Esses microrganismos por vezes são de difícil remoção pois podem ter a capacidade de formar biofilme causando prejuízos a indústria e também para saúde pública. O uso de agentes sanitizantes convencionais é de grande importância, porém vem aumentando a procura de compostos naturais, devido a mudança nas atitudes dos consumidores em relação ao uso de agentes sintéticos e ou impacto ao meio ambiente, mas por resistência aos antimicrobianos e sanitizantes comerciais. O objetivo deste estudo foi caracterizar o perfil de sensibilidade de Staphylococcus spp isolados de utensílios de um abatedouro bovino frente a antimicrobianos convencionais e avaliar atividade antibacteriana e antibiofilme do óleo essencial de alecrim (Rosmarinus officinalis L.). Foram coletados suabes de superfícies e utensílios durante o processo de abate de um frigorifico de pequeno porte de uma cidade no noroeste do estado do Paraná. A partir dessa coleta, foi feito o isolamento de Staphylococcus spp em ágar manitol, em seguida feito a coloração de gram, provas de catalase e coagulase para diferenciação de Staphylococcus coagulase positiva e Staphylococcus coagulase negativa. Foi realizado o teste de susceptibilidade aos antimicrobianos; amicacina (30µg), amoxicilina (10µg), amoxicilina + ácido clavulânico (20/10µg), cefoxitina (30µg), ceftiofur (30µg), clindamicina (2µg), cloranfenicol (30µg), doxiciclina (30µg), eritromicina (15 µg), meropenem (10 µg), norfloxacina (10 µg), oxacilina (1 µg), rifampicina (5 µg), reação em cadeia pela polimerase (PCR) para identificação de Staphylococcus aureus e pesquisa do gene mecA. O estudo para produção de biofilme foi feito pelo método de aderência em tubo de borossilicato e pela aderência em placa de poliestireno. Posteriormente foi investigada a atividade antibacterina do óleo essencial R. officinales e sua capacidade de inibição de biofilme nesses mesmos isolados. Das amostras coletadas, 22 foram identificados como Staphylococcus coagulase negativa e cinco como Staphylococcus coagulase positiva. Todos os Staphylococcus spp. apresentaram resistencia a antibióticos sendo a clindamicina (33,33%) e rifampicina (37%) os que apresentaram o maior índice de resistência. Nenhuma das amostras de Staphylococcus coagulase positiva foi confirmada como Staphylococcus aureus por PCR e nenhuma foi positiva para presença de gene de resistência mecA. Dentre os isolados, 48% teve seu crescimento inibido pelo óleo essencial de R. officinalis na concentração de 16.000µg/mL. Desses isolados nove foram positivos para produção de biofilme e este também foi inibido pelo óleo essencial, por outro lado, o sanitizante comercial cessou a produção de biofilme na maior concentração, 6%, somente em quatro amostras. Dessa forma, foi observado resistência a antibióticos, principalmente a clindamicina e rifampicina em todos os isolados em Staphylococcus spp. oriundos de superfícies e utensílios do abate. Contudo essa resistência foi mais concentrada em dois antibióticos. Por outro lado, o óleo essencial de R. officinalis mostrou-se efetivo na inibição bacteriana e do biofilme. Sendo assim esse óleo essencial pode ser uma alternativa para o desenvolvimento de produtos sanitizantes usados no setor alimentício.
Palavras-chave
Bactéria. Biofilme. Carne. Desinfetante. Bioativo
Title
Biological profile of Staphylococcus spp. cattle slaughterhouse isolates and their sensitivity to Rosmarinus officinalis essential oil
Abstract
Because meat has favorable conditions for the multiplication of pathogenic and deteriorating microorganisms, it generates the need for its handlers to have training and awareness about good manufacturing practices and hygienic sanitary conditions, since it can interfere with the quality of the food, being a major problem for public health. These microorganisms are sometimes difficult to remove as they may have the ability to form biofilms causing damage to industry and also to public health. The use of conventional sanitizing agents is of great importance, but the demand for natural compounds has been increasing, due to the change in consumer attitudes towards the use of synthetic agents and or impact on the environment, but due to resistance to antimicrobials and commercial sanitizers. The aim of this study was to characterize the sensitivity profile of Staphylococcus spp isolated from utensils of a bovine slaughterhouse against conventional antimicrobials and to evaluate the antibacterial and antibiofilm activity of rosemary essential oil (Rosmarinus officinalis L.). Swabs were collected from surfaces and utensils during the slaughtering process of a small refrigerator in a city in the northwest of the state of Paraná. From this collection, Staphylococcus spp was isolated on mannitol agar, followed by Gram staining, catalase and coagulase tests to differentiate between coagulase-positive Staphylococcus and coagulase-negative Staphylococcus. The antimicrobial susceptibility test was performed; amikacin (30µg), amoxicillin (10µg), amoxicillin + clavulanic acid (20/10µg), cefoxitin (30µg), ceftiofur (30µg), clindamycin (2µg), chloramphenicol (30µg), doxycycline (30µg), erythromycin (15µg) , meropenem (10 µg), norfloxacin (10 µg), oxacillin (1 µg), rifampicin (5 µg), polymerase chain reaction (PCR) for identification of Staphylococcus aureus and research of the mecA gene. The study for biofilm production was carried out by the method of adhesion in borosilicate tube and by adhesion in polystyrene plate. Subsequently, the antibacterial activity of R. officinales essential oil and its ability to inhibit biofilm in these same isolates were investigated. Of the samples collected, 22 were identified as coagulase-negative Staphylococcus and five as coagulase-positive Staphylococcus. All Staphylococcus spp. showed resistance to antibiotics and clindamycin (33.33%) and rifampicin (37%) showed the highest resistance rate. None of the coagulase-positive Staphylococcus samples were confirmed as Staphylococcus aureus by PCR and none were positive for the presence of the mecA resistance gene. Among the isolates, 48% had their growth inhibited by the essential oil of R. officinalis at a concentration of 16,000µg/mL. Of these isolates, nine were positive for biofilm production and this was also inhibited by the essential oil, on the other hand, the commercial sanitizer stopped producing biofilm in the highest concentration, 6%, in only four samples. Thus, resistance to antibiotics, especially clindamycin and rifampicin, was observed in all isolates of Staphylococcus spp. from slaughter surfaces and utensils. However, this resistance was more concentrated in two antibiotics. On the other hand, the essential oil of R. officinalis proved to be effective in inhibiting bacterial and biofilm. Therefore, this essential oil can be an alternative for the development of sanitizing products used in the food sector.
Keywords
Bacteria. Biofilm. Beef. Disinfectant. Bioactive