Pesquisa
Perfil de resistência aos antimicrobianos e atividade antimicrobiana do extrato metanólico de Pereskia aculeata Mill. Frente a cepas de Escherichia coli isoladas de carcaças de frango de corte
Mestrado em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos
Autor: Maria Augusta Dorigan Bondezan
Orientador: Luciana Kazue Otutumi
Defendido em: 23/02/2024
Resumo
O Brasil encontra-se como o segundo maior produtor mundial de carne de frango com uma produção de 14,524 milhões de toneladas de carne no ano de 2022, sendo que 33% desta produção foram destinadas ao mercado externo. Além do aumento do consumo de carne, a manutenção de sua qualidade, por meio da redução da contagem de bactérias, principalmente porque a carne pode veicular micro-organismos com perfil de multirresistência, demonstra a necessidade de busca de produtos alternativos com potencial antimicrobiano, tais como os extratos de plantas. Com isso, o objetivo do trabalho foi avaliar o perfil de resistência aos antimicrobianos de cepas de Escherichia coli isoladas de carcaças de frangos de corte de um abatedouro localizado na região noroeste do estado do Paraná e a atividade antimicrobiana do extrato metanólico da das folhas de Pereskia aculeata Mill. frente às mesmas cepas, por meio da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM). Para isso, foram colhidas aleatoriamente 40 carcaças de frangos de corte oriundos de dois aviários (A e B). Cada uma das amostras foi coletada por meio de lavagem das carcaças com 450 mL de água peptonada 0,1% em sacos estéreis individuais antes da etapa de evisceração. Do lavado obtido foi retirada uma alíquota de 100 mL a qual foi mantida refrigerada até processamento no Laboratório de Medicina Veterinária Preventiva do Programa de Pós-graduação em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos. As amostras foram incubadas em estufa microbiológica à 37ºC por 24 horas e em seguida, foram semeadas em ágar MacConkey para posteriormente isolar uma colônia para identificação bioquímica de enterobactérias. Em todas as carcaças foi possível isolar uma cepa de E. coli. Esses isolados foram submetidos ao método de difusão em disco para avaliação do perfil de resistência frente a 13 antimicrobianos. A determinação da CIM e CBM do extrato metanólico de P. aculeata foi feito pelo método de microdiluição em caldo utilizando-se de microplacas de 96 poços em concentrações variando entre 20 e 0,039 mg/mL. O extrato bruto das folhas foi obtido por maceração dinâmica com esgotamento de solvente (metanol) e quantificado alguns compostos por Cromatografia de Liquida de Alta Eficiência. Os resultados da resistência aos diferentes antimicrobianos não diferiu (P>0,05) entre os aviários, sendo que a amoxicilina foi o antimicrobiano com maior perfil de resistência tanto para o aviário A (70%) quanto para o aviário B (75%). No entanto, o Aviário B apresentou maior percentual de cepas com perfil de multirresistência (30%) em relação ao Aviário A (25%). Não foi possível determinar a CIM e a CBM do extrato metanólico de P. aculeata, visto que todas as cepas de E. coli não foram inibidas ou mortas em nenhuma das concentrações do extrato avaliadas. Os compostos que apresentaram maiores concentrações foi o ácido trans cinâmico (50,13 mg/100g) e o acido cafeico (17,03 mg/100g). Conclui-se que as carcaças de frangos de corte são carreadoras de cepas de E. coli com perfil de multirresistência aos antimicrobianos e que o extrato metanólico da P. aculeata não inibe seu crescimento em concentrações menores ou igual a 20 mg/mL demonstrando a necessidade de novos estudos com outras formas de extração.
Palavras-chave
Aves. Concentração Bactericida Mínima. Concentração Inibitória Mínima. Multirresistência. Enterobactérias. Ora-pro-nóbis.
Title
Antimicrobial resistance profile and antimicrobial activity of the methanolic extract of Pereskia aculeata Mill against Escherichia coli isolated from broiler chicken carcasses.
Abstract
Brazil is the second largest producer of chicken meat in the world with a production of 14.524 million tons of meat in 2022, with 33% of this production destined for the foreign market. In addition to increasing meat consumption, maintaining its quality by reducing bacteria counts, mainly because meat can carry microorganisms with a multi-resistance profile, demonstrates the need to search for alternative products with antimicrobial potential, such as such as plant extracts. Therefore, the objective of the work was to evaluate the antimicrobial resistance profile of Escherichia coli strains isolated from broiler chicken carcasses from a slaughterhouse located in the northwest region of the state of Paraná and the antimicrobial activity of the methanolic extract of Pereskia leaves. aculeata Mill. against the same strains, by determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC). For this, 40 carcasses of broiler chickens were randomly collected from two poultry farms (A and B). Each of the samples was collected by washing the carcasses with 450 mL of 0.1% peptone water in individual sterile bags before the evisceration stage. A 100 mL aliquot was removed from the wash obtained and kept refrigerated until processing in the Preventive Veterinary Medicine Laboratory of the Postgraduate Program in Animal Science with Emphasis on Bioactive Products. The samples were incubated in a microbiological oven at 37ºC for 24 hours and then were seeded on MacConkey agar to later isolate a colony for biochemical identification of enterobacteria. In all carcasses it was possible to isolate a strain of E. coli. These isolates were subjected to the disk diffusion method to evaluate the resistance profile against 13 antimicrobials. The determination of the MIC and MBC of the methanolic extract of P. aculeata was carried out by the broth microdilution method using 96-well microplates at concentrations ranging between 20 and 0.039 mg/mL. The crude leaf extract was obtained by dynamic maceration with solvent exhaustion (methanol) and some compounds were quantified by High Performance Liquid Chromatography. The results of resistance to different antimicrobials did not differ (P>0.05) between poultry farms, with amoxicillin being the antimicrobial with the highest resistance profile for both poultry farm A (70%) and poultry farm B (75%). However, Farm B had a higher percentage of strains with a multidrug resistance profile (30%) compared to Farm A (25%). It was not possible to determine the MIC and MBC of the methanolic extract of P. aculeata, since all E. coli strains were not inhibited or killed at any of the extract concentrations evaluated. The compounds that presented the highest concentrations were trans cinnamic acid (50.13 mg/100g) and caffeic acid (17.03 mg/100g). It is concluded that broiler carcasses carry strains of E. coli with a multi-resistance profile to antimicrobials and that the methanolic extract of P. aculeata does not inhibit its growth at concentrations less than or equal to 20 mg/mL, demonstrating the need of new studies with other forms of extraction.
Keywords
Poultry. Minimum Bactericidal Concentration. Minimum Inhibitory Concentration. Multiresistance. Enterobacteria. Ora-pro-nóbis.