Pesquisa
Perfil de resistência de Staphylococcus spp. em gestantes e uso de extratos de plantas medicinais como perspectiva terapêutica.
Doutorado em Ciência Animal com Enfase em Produtos Bioativos
Autor: Edinalva Madalena de Almeida Mota Rosa
Orientador: Daniela Dib Gonçalves
Defendido em: 28/04/2022
Resumo
Os Staphylococcus spp. tem sido descrito como integrantes rotineiros da microbiota do ser humano em superfície de regiões mais úmidas do corpo, enquanto algumas espécies e subespécies apresentam predileção pela região urogenital. Também são considerados oportunistas e frequentemente tem sido causa de infeção em pacientes com comprometimento do sistema imunológico ou em uso de dispositivos invasivos em pacientes hospitalizados. No entanto, nos últimos anos, houve uma disseminação dessas cepas pela comunidade, o que possivelmente pode estar relacionado a pressão seletiva pelo uso inadequado dos antibióticos. As infecções causadas por Staphylococcus spp. meticilina resistente tem causado sérios problemas dentro e fora do ambiente hospitalar. Dentro da comunidade causa colonização de pessoas aumentando a chance de óbito em todos os sexos e faixa etária e em gestantes têm sido consideradas importantes fontes de microrganismos patógenos pelos fatores de virulência apresentados por essa bactéria e pelas condições fisiológicas e anatômicas da gestante, tornando-se, dessa forma, uma ameaça de propagação de infecções por cepas multirresistentes. Dessa forma, o objetivo desta tese foi investigar o perfil de resistência antimicrobiana em isolados de Staphylococcus spp. coagulase negativos de gestantes e avaliar a atividade antibacteriana dos extratos aquosos de Bidens sulphurea (Cosmo de jardim) e Tanacetum vulgare L. (Catinga de mulata) frente a isolados de Staphylococcus spp. resistentes a meticilina da microbiota vaginal de gestantes. Para isso, foram avaliadas gestantes assintomáticas entre 16 e 38 anos, que realizaram exame microbiológico por meio de coleta de swab vaginal no primeiro trimestre de gestação no Laboratório de Análises Clínicas da UNIPAR. As amostras foram coletadas por meio de swab durante o pré-natal nos diferentes trimestres da gestação. Posteriormente à coleta, as amostras foram encaminhadas do setor de coleta do Laboratório de Análises Clínicas da Unipar para a microbiologia clínica do mesmo para um primoisolamento em meio de manitol e incubado por até 48h a 37ºC. A seguir as amostras foram encaminhadas para o Laboratório de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Pública do Programa de Pós-graduação em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos para identificação dos micro-organismos isolados e determinação do perfil de resistência aos antimicrobianos. Os isolados com resistência a oxacilina foram submetidos a estudo detalhado para identificação do gene mecA. Neste trabalho, foi possível isolar oitenta e três amostras Staphylococcus spp. coagulase negativa e seis Staphylococcus spp. coagulase positiva, também foram obtidos isolados cinco de Streptococcus e não houve crescimento bacteriano em seis amostras de swabs vaginais em gestantes, apresentando altos índices de resistência. Deste total, quinze isolados mostraram perfil de resistência fenotípico compatível à presença do gene mecA e estes foram utilizados para a avaliar a atividade antibacteriana dos extratos aquosos de Bidens sulphurea (Cosmo de jardim) e Tanacetum vulgare L. (Catinga de mulata). Os extratos aquosos de Bidens sulphurea (Cosmo de jardim) e Tanacetum vulgare L. (Catinga de mulata) foram obtidos por infusão com pequenas modificações, conforme recomendado pelo uso popular. Na análise cromatográfica dos extratos aquosos, a B. sulphurea teve como seu composto majoritário, a artemetina (C20H20O8) e a T. vulgare apresentou mais de um composto em grande quantidade, sendo eles; a artemetina (15,74%) verrucarol (15,61%), fitol (14,03%), 7,8- Epoxilanostan-11-ol, 3-acetoxi (13,12%), e o ácido oleanólico (10,19%). A avaliação da atividade antibacteriana dos extratos vegetais de B. sulphurea( e T. vulgare L. foi realizada pela metodologia de Microdiluição em Caldo. Os isolados testados frente aos extratos aquosos de B. sulphurea e de T. vulgare L., obtiveram concentrações inibitórias mínimas (CIM) entre 1,17mg/ml e 37,5mg/ml, concentrações bactericidas mínimas (CBM) de B. sulphurea variaram entre 75mg/ml e 150mg/ml, já as CBM de T. vulgare L., apresentaram menores valores variando entre 9,37mg/ml e 150mg/ml. Neste trabalho ficou confirmado a atividade bactericida e bacteriostática dos extratos de Bidens sulphurea e Tanacetum vulgare L. e em se tratando de isolados que possuem o gene de resistência mecA, é possível atestar que estes extratos são uma excelente alternativa, ou ainda poderão ser utilizados suplementação terapêutica em situações onde os fármacos convencionais sozinhos não conseguem repostas frente ao tratamento de diferentes infecções estafilococias.
Palavras-chave
Infecção estaflocócica. Gestação. mecA. MRS.
Title
Resistance profile of Staphylococcus spp. in pregnant women and use of herbal extracts as a therapeutic perspective.
Abstract
Staphylococcus spp. has been described as a routine part of the human microbiota on the surface of more humid regions of the body, while some species and subspecies have a predilection for the urogenital region. They are also considered opportunistic and have often been a cause of infection in patients with compromised immune systems or using invasive devices in hospitalized patients. However, in recent years, there has been a spread of these strains through the community, what could possibly be related to selective pressure due to inappropriate use of antibiotics. Infections caused by Staphylococcus spp. resistant methicillin has caused serious problems inside and outside the hospital setting. Within the community, it causes colonization of people, increasing the chance of death in all sexes and age groups and in pregnant women they have been considered important sources of pathogenic microorganisms due to the virulence factors presented by this bacterium and the physiological and anatomical conditions of the pregnant woman, becoming , thus, a threat of propagation of infections by multidrug-resistant strains. Thus, The aim of this thesis was, to investigate the profile of antimicrobial resistance in Staphylococcus spp. coagulase negative in pregnant women and to evaluate the antibacterial activity of aqueous extracts of Bidens sulphurea (Cosmo de jardin) and Tanacetum vulgare L. (Catinga de mulata) against Staphylococcus spp. resistant to methicillin in the vaginal microbiota of pregnant women. For this, asymptomatic pregnant women between 16 and 38 years old were evaluated, who underwent microbiological examination by means of vaginal swab collection in the first trimester of pregnancy at the Clinical Analysis Laboratory of UNIPAR. The samples were collected by means of swab during prenatal care in the different trimesters of pregnancy. After collection, the samples were sent from the collection sector of the Clinical Analysis Laboratory of Unipar to the clinical microbiology of the same for a primer isolation in mannitol medium and incubated for up to 48 hours at 37ºC. The samples were then sent to the Laboratory of Preventive Veterinary Medicine and Public Health of the Postgraduate Program in Animal Science with Emphasis on Bioactive Products to identify the isolated microorganisms and determine the antimicrobial resistance profile. The isolates with resistance to oxacillin were submitted to a detailed study to identify the mecA gene. In this work, it was possible to isolate eighty-three Staphylococcus spp. negative coagulase and six Staphylococcus spp. positive coagulase, five isolates of Streptococcus were also obtained and there was no bacterial growth in six samples of vaginal swabs from pregnant women, showing high levels of resistance. Of this total, fifteen isolates showed a phenotypic resistance profile compatible with the presence of the mecA gene and these were used to evaluate the antibacterial activity of the aqueous extracts of Bidens sulphurea (Cosmo de jardin) and Tanacetum vulgare L. (Catinga de mulata). The aqueous extracts of B. sulphurea (Cosmo de jardin) and T. vulgare L. (Catinga de mulata) were obtained by infusion with minor modifications, as recommended by popular use. In the chromatographic analysis of the aqueous extracts, B. sulphurea had artemetin (C20H20O8) as its major compound and T. vulgare had more than one compound in large amounts, namely; artemetin (15.74%), verrucarol (15.61%), phytol (14.03%), 7,8-Epoxylanostan-11-ol, 3-acetoxy (13.12%), and oleanolic acid (10 .19%). The evaluation of the antibacterial activity of plant extracts of B. sulphurea and T. vulgare L. was carried out by the method of Microdilution in Broth. The isolates tested against aqueous extracts of B. sulphurea and T. vulgare L., obtained minimum inhibitory concentrations (MIC) between 1.17mg/ml and 37.5mg/ml, minimum bactericidal concentrations (MBC) of B. sulphurea varied between 75mg/ml and 150mg/ml, whereas the CBM of T. vulgare L., presented lower values, varying between 9.37mg/ml and 150mg/ml. In this work, the bactericidal and bacteriostatic activity of the extracts of Bidens sulphurea and Tanacetum vulgare L. was confirmed and, in the case of isolates that have the mecA resistance gene, it is possible to attest that these extracts are an excellent alternative, or supplementation can still be used. therapy in situations where conventional drugs alone are not able to respond to the treatment of different staphylococcal infections.
Keywords
Gestation. mecA. MRS. Staphylococcal infection