Pesquisa
Prospecção farmacológica etno-guiada das atividades diuréticas de espécies medicinais nativas
Mestrado em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos
Autor: Thiago Bruno Lima Prando
Orientador: Arquimedes Gasparotto Junior
Defendido em: 26/02/2015
Resumo
RESUMO: Estudos demonstram que pesquisas envolvendo produtos naturais dotados de possível atividade diurética estão em ascensão nas ultimas décadas. No Brasil, destacam-se a Cuphea carthagenensis (CC), Phyllanthus tenellus (PT), e a Echinodorus grandiflorus (EG), entretanto inexistem dados etnofarmacológicos que justifiquem seu maciço uso popular. O objetivo geral deste estudo foi avaliar as atividades diuréticas do sobrenadante etanólico do infuso (SEI) destas três espécies em ratos. Inicialmente, verificamos os possíveis efeitos do SEI (30, 100 e 300 mg/kg), obtidos destas três espécies, em experimentos de diurese aguda. Após 1-8 h, o volume urinário foi determinado. Foram mensurados alguns eletrólitos (Na+, K+, Cl- e HCO3-), além do pH e densidade. A atividade antioxidante in vitro foi verificada através do radical livre DPPH, hemólise induzida por AAPH e dosagem de malondialdeído (MDA).Os metabólitos secundários, também foram estimados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE-UV). Posteriormente, a atividade diurética prolongada foi avaliada com a espécie mais promissora. Os procedimentos foram os mesmos descritos anteriormente, porém a urina foi coletada diariamente por sete dias. As concentrações plasmáticas de eletrólitos, uréia, creatinina, aldosterona e enzima conversora da angiotensina foram determinadas no sétimo dia. Os efeitos do SEI na pressão arterial média (PAM) de ratos normotensos e com hipertensão renovascular (2K1C) foram também verificados. Após anestesia com cetamina/xilazina (100/20 mg/kg; i.m.) os animais receberam uma incisão no duodeno para administração do SEI e tiveram um cateter de polietileno introduzido na artéria carotídea para o registro da PAM. O envolvimento do óxido nítrico, bradicinina, prostaglandinas ou acetilcolina na atividade diurética aguda, nos efeitos hipotensores ou anti-hipertensivos também foram investigados. A atividade antioxidante ex vivo foi verificada através da determinação plasmática do nitrito e das espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Todos os procedimentos foram aprovados pelo comitê de ética em pesquisa envolvendo experimentação animal da UNIPAR. Os resultados obtidos mostraram que após 8 h da administração do SEI-CC e SEI-PT o volume urinário e a concentração de eletrólitos não se mostraram alterados. A administração do SEI-EG (300 mg/kg) produziu um expressivo aumento do volume urinário e da excreção renal de sódio. Os três extratos foram capazes de inibir a formação do DPPH e a hemólise por AAPH, porém somente o SEI-EG manteve baixos os níveis de MDA, tornando-o assim, a espécie mais promissora. Nos tratamentos 9 prolongados (sete dias) o volume e as concentrações urinárias de Na+ permaneceram significativamente aumentados do 2º até o 7º dia. O efeito natriurético induzido pelo SEI-EG foi substancialmente reduzido pelo HOE- 140, indometacina, L-NAME ou atropina (~50%). Todos os outros parâmetros urinários e plasmáticos não foram afetados. O valor da PAM basal nos animais normotensos, registrados antes da administração de qualquer substância foi de 105 ± 5 mm Hg, enquanto nos animais 2K1C foi de 148 ± 9 mm Hg. A administração intraduodenal do SEI-EG (300 mg/kg) reduziu a PAM em ratos normotensos anestesiados em 7,8 ± 0,5 mm Hg enquanto em animais 2K1C os valores reduzidos para 14,0 ± 1,0 mm Hg. Os efeitos hipotensores a anti-hipertensivos induzidos pelo SEI-EG (300 mg/kg) também foram substancialmente reduzidos após a administração L-NAME, indometacina, HOE-140 ou atropina. Corroborando com os dados apresentados, o SEI-EG elevou significativamente os níveis plasmáticos de nitrito e reduziu a produção de TBARS. Desta forma, os resultados explicitados neste trabalho mostram que o SEI obtido de do E. grandiflorus apresenta importantes efeitos diuréticos, hipotensores e anti-hipertensivos. Análises fitoquímicas realizadas mostram que os elevados níveis de diterpenos clerodanos identificados nesta espécie podem ter contribuído com esta resposta. Evidências sugerem que estes efeitos podem ser dependentes da liberação de prostanóides e óxido nítrico endotelial via receptores B2 de bradicinina e muscarínicos M3.
Palavras-chave
Cuphea carthagenensis; Echinodorus grandiflorus; Phyllanthus tenellus; diurético; hipotensor; antihipertensivo
Title
Prospecting ethno-pharmacological guided the diuretic activity of native medicinal species
Abstract
Studies show that researches involving natural products endowed with possible diuretic activity are rising in the last decades. In Brazil highlights the Cuphea carthagenensis (CC), Phyllanthus tenellus (PT), and the Echinodorus grandiflorus (EG), however there are no ethnopharmacological data supporting its massive popular use. The aim of this study was to evaluate the diuretic activities of the ethanolic supernatant infusion (SEI) of these three species in mice. Initially, it wasverified the possible effects of the SEI (30, 100 and 300 mg/kg), that were obtained from these three species in acute diuresis experiments. After 1-8 h, the urinary volume was determined. It was done the measurement of some electrolytes (Na+, K+, Cl- and HCO3-), besides the pH and density. In vitro antioxidant activity was checked by free radical DPPH, induced hemolysis by AAPH, and malondialdehyde (MDA) dosage. The secondary metabolites were also estimated by high performance liquid chromatography (HPLC-UV). Subsequently, prolonged diuretic activity was evaluated with the most promising species. The procedures were the same as described before, however the urine was collected daily for seven days. The plasma concentrations of electrolytes, urea, creatinine, aldosterone and angiotensin converting enzyme were determined on the seventh day. The effects of SEI in mean arterial pressure (MAP) of normotensive and renovascular hypertensive mice (2K1C) were also determined. After anesthesia with ketamine/xylazine (100/20 mg/kg, i.m.) the animals received an incision in the duodenum to administrate SEI and had a polyethylene catheter inserted into the carotid artery to record the MAP. The connection of nitric oxide, bradykinin, acetylcholine and prostaglandin in acute diuretic activity, in the hypotensive or anti-hypertensive effects were also investigated. Ex vivo antioxidant activity was checked by plasmatic determination of nitrite and thiobarbituric acid reactive species (TBARS). All procedures were approved by the ethics committee on research involving animal experimentation of UNIPAR. The obtained results showed that after 8 h of administration CES-CC and SEI-PT urine volume and electrolytes concentration had not changed. The administration of the SEI-EG (300 mg/kg) produced a significant raise in urine volume and sodium renal excretion. The three extracts were able to inhibit the formation of DPPH and the hemolysis by AAPH, however just the SEI-EG maintained low levels of MDA, thus making it the most promising species. In prolonged treatments (seven days) the volume and urinary concentrations of Na+ remained significantly increased in the 2nd to the 7th day. The 11 natriuretic effect induced by SEI-EG was substantially reduced by HOE- 140, indomethacin,L-NAME or atropine (~ 50%). The other urinary and plasmatic parameters were not affected. The value of the basal MAP in the normotensive animals was recorded before the administration of any other substance was 105 ± 5 mmHg, while in 2K1C animals was 148 ± 9 mm Hg. The intraduodenal administration of SEI-EG (300 mg/kg) reduced MAP in anesthetized normotensive mice at 7.8 ± 0.5 mmHg while in 2K1C animals values were reduced to 14.0 ± 1.0 mmHg. The hypotensive and antihypertensive effects induced by SEI EG (300 mg/kg) were also substantially reduced after the administration of L-NAME, indomethacin, HOE-140 or atropine. Corroborating with the data presented, the SEI-EG increased significantly plasmatic levels of nitrite and reduced the production of TBARS. Therefore, the results presented in this study showed that SEI obtained from E. grandiflorus has important diuretic, hypotensive and anti-hypertensives effects. Phytochemical analysis realized show that the elevated levels of clerodanes diterpenes identified in this species may have contributed to this response. Evidences suggest that these effects can be dependent on the prostanoids release and endothelial nitric oxide pathway of bradykinin B2 and muscarinic M3 receptors.
Keywords
Cuphea carthagenensis; Echinodorus grandiflorus; Phyllanthus tenellus; diuretic; hipotensive; antihypertensive