Sorologia, isolamento e genotipagem de Toxoplasma gondii de roedores sinantrópicos comensais e avaliação experimental da detecção de anticorpos contra o parasito em amostras de tecidos

Mestrado em Ciência Animal com Ênfase em Produtos Bioativos
Autor: Jacqueline Batista de Araújo
Orientador: Aristeu Vieira da Silva
Defendido em: 02/03/2010

Resumo

Os roedores sinantrópicos comensais podem participar do ciclo epidemiológico de diversas enfermidades, entre elas a toxoplasmose. O presente trabalho objetivou verificar a infecção de roedores sinantrópicos em área urbana na cidade de Umuarama-PR e comparar a detecção de anticorpos contra T. gondii pelo método de aglutinação direta em amostras de fígado, baço e musculatura de camundongos cronicamente infectados, além de verificar a influência da autólise na performance da detecção de anticorpos em tecidos. Neste estudo foram verificados a presença de anticorpos séricos contra Toxoplasma gondii pelo método de aglutinação direta em 43 roedores capturados na área urbana de Umuarama, PR, Brasil. Além disso, amostras de cérebro e coração foram coletadas, digeridas em pepsina e inoculadas em camundongos para isolamento do parasito. As cepas isoladas foram submetidas à genotipagem multilocus. Todos os roedores foram soronegativos, e o parasito isolado de um Mus musculus e um Rattus rattus, sendo as cepas classificadas como similares a cepas de T. gondii isoladas anteriormente em gatos no Estado do Paraná. Diversos testes de detecção de anticorpos têm sido propostos desde a descrição inicial do teste de Sabin-Feldman, usualmente utilizando o soro sanguíneo como amostra para a detecção. Tecidos e líquidos fetais também podem ser utilizados para a pesquisa de anticorpos, entretanto poucos trabalhos comparam a performance desta detecção em amostras pareadas com soro sanguíneo, e a avaliação do efeito da autólise não foi verificado. Desta forma, este trabalho apresenta também os resultados de sensibilidade, especificidade e a eficiência do método de aglutinação direta na detecção de anticorpos anti-T. gondii em amostras de fígado, baço e musculatura, recém coletadas, ou autolisadas, oriundas de camundongos cronicamente infectados. A avaliação de anticorpos foi mais eficiente nas amostras de musculatura, seja naquelas recém coletadas, ou nas provenientes de tecidos autolisados.

Palavras-chave

Roedores sinantrópicos, tipagem de cepas, detecção de anticorpos em tecidos, curvas ROC.

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Title

SEROLOGY, ISOLATION AND GENOTYPING OF Toxoplasma gondii OF COMMENSAL RODENTS SYNANTHROPIC AND EXPERIMENTAL EVALUATION OF DETECTION OF ANTIBODIES AGAINST THE PARASITE IN TISSUE SAMPLES

Abstract

Synanthropic commensal rodents may participate in epidemiological cycle of many diseases, including toxoplasmosis. This work aims to verify the infection of synanthropic rodents in the urban area of Umuarama municipality, PR, and compare the detection of anti-Toxoplasma gondii antibodies by modified agglutination test in samples of liver, spleen and muscular tissue of chronically infected mice, besides verify the influence of autolysis in the performance of antibody detection in tissues. Anti-T. gondii antibodies were verified by modified agglutination test in 43 rodents captured in Umuarama urban area, PR, Brazil. Samples of heart and brain are collected, digested by pepsin and inoculated in mice for parasite isolation. Isolated strains were submitted to multilocus genotyping. All rodent are serum negative, but the parasite were isolated from one Mus musculus and one Rattus rattus, being the strains classified as similar to strains of T. gondii isolated from cats in Parana State. Many antibody detection tests have been proposed until initial description of Sabin-Feldman dye test, usually using sera from blood as sample for detection. Tissues and fetal fluids may be utilized for antibody detection too, although few research compare the performance of this detection in paired samples of blood sera, and the evaluation of autolysis effect was not been verified. This research presents results of sensibility, specificity and the efficiency of modified agglutination test in anti-T. gondii antibody detection in samples of liver, spleen and muscle, freshly collected or autolysed, from chronically infected mice. Antibody evaluation were more efficient in freshly and autolysed muscle samples.

Keywords

Synanthropic rodent, strain typing, tissue antibody detection, ROC curve